基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法

王芳; 董菁; 李艳妮; 徐秦峰

doi:10.19969/j.fxcsxb.21123104

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法

研究报告 | 更新时间：2022-07-01

- 基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法
- A Visualized Closed-tube Detection Method for Loop-mediated Isothermal Amplification Based on Nucleic Acid Molecular Light Switch
- 分析测试学报 2022年41卷第4期页码：646-651
- 作者机构：
  
  陕西科技大学食品与生物工程学院，陕西西安 710021
- 作者简介：
  
  徐秦峰，博士，教授，研究方向：食品安全检测，E－mail：xuqinfeng@sust.edu.cn
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金资助项目(22074085);国家重点研发计划子课题(2019YFC1606302)
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.21123104
  中图分类号：
扫描看全文
王芳,董菁,李艳妮等.基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法[J].分析测试学报,2022,41(04):646-651.

WANG Fang,DONG Jing,LI Yan-ni,et al.A Visualized Closed-tube Detection Method for Loop-mediated Isothermal Amplification Based on Nucleic Acid Molecular Light Switch[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(04):646-651.
王芳,董菁,李艳妮等.基于核酸分子光开关的闭管可视化环介导等温扩增检测方法[J].分析测试学报,2022,41(04):646-651. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21123104.

WANG Fang,DONG Jing,LI Yan-ni,et al.A Visualized Closed-tube Detection Method for Loop-mediated Isothermal Amplification Based on Nucleic Acid Molecular Light Switch[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(04):646-651. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21123104.

摘要

该研究采用核酸分子“光开关”［Ru（bpy）,2,（dppz）］,2+,作为环介导等温扩增（LAMP）荧光染料，建立了一种快速、直观的闭管可视化LAMP检测方法。为避免高浓度染料对LAMP反应造成的强烈抑制和开盖导致的气溶胶交叉污染，该文采用蜡封反应管进行检测，通过直接观察扩增产物DNA与［Ru（bpy）,2,（dppz）］,2+,结合后产生的强烈红色荧光信号判定结果。该方法对金黄色葡萄球菌DNA的检出限可低至20拷贝/反应。方法特异性强，整个可视化检测过程可在1 h内完成，有望广泛应用于环境检测、食品安全、临床诊断等领域的现场快速核酸检测。

Abstract

Compared with polymerase chain reaction（PCR） nucleic acid amplification，loop-mediated isothermal amplification（LAMP） does not require thermal cycling instruments，which is more suitable for rapid on-site detection．However，the small Stoke′s shift of currently used organic fluorescent dye for visualized LAMP leads to insufficient color differentiation．In this study，the nucleic acid molecule“light switch”［Ru（bpy）,2,（dppz）］,2+, was exploited as a LAMP fluorescent dye to establish a rapid visualized closed-tube method for LAMP detection．Visualization detection requires a high concentration of dye，but its adding before amplification reaction will strongly inhibit LAMP reaction，while its adding after reaction by opening the lid will lead to a serious aerosol cross contamination．Therefore，wax was chosen to seal the［Ru（bpy）,2,（dppz）］,2+, at the bottom of the tube，and the LAMP amplification products were visually detected by using the strong red fluorescence emission of ［Ru（bpy）,2,（dppz）］,2+, in the presence of double-strand DNA．The ,S.aureus, DNA could be detected as low as 20 copies/reaction with strong specificity，and the whole visual detection process could be completed within 1 h．It could be widely used for the rapid on-site nucleic acid detection in the fields of environmental detection，food safety and clinical diagnosis．

关键词

环介导等温扩增法（LAMP）［Ru（bpy）2（dppz）］2+可视化检测金黄色葡萄球菌

Keywords

LAMP isothermal amplification［Ru（bpy）2（dppz）］2+visual detectionS. aureus

references

Yao B B，Yan C，Yao L，Chen Z R，Chen W．J. Instrum. Anal. （姚帮本，闫超，姚丽，陈赵然，陈伟．分析测试学报），2021，40（5）：617－627.

Linacero R，Sanchiz A，Ballesteros I，Cuadrado C．Crit. Rev. Food Sci. Nut.，2020，60（7）：1077－1093.

Pandey M，Singh D，Onteru S K．J. Cell. Biochem.，2018，119（6）：4334－4338.

Ge H，Wu M C，Zhang M Z，Yu X P．J. Instrum. Anal. （葛航，吴朦晨，张明洲，俞晓平．分析测试学报），2019，38（7）：874－881.

Luo Y，Wu X M，Liu A L，Yao X L，Li R Y，Geng G D．Zhejiang J. Agric.Sci. （罗跃，吴小毛，刘阿丽，姚小龙，李荣玉，耿广东．浙江农业学报），2022，34（1）：98－103.

Fang J H，Wu Y Y，Qu D F，Ma B，Yu X P，Zhang M Z，Han J Z．Lett. Apol. Microbiol.，2018，67（1）：79－88.

Bai R，Bai L L，Wang S Y，Zhang F．Chin. J. Agric. Biotechol. （白榕，白琳琳，汪少芸，张芳．农业生物技术学报），2021，29（10）：2016－2030.

Xu Q F，Dong J，Ma X Y，Zhao Y N，Li C C，Zhang C Y．Anal. Chem.，2019，91（14）：8777－8782.

Chen B B，Xiao G Y，He M，Hu B．Anal. Chem.，2021，93（2）：9454－9461.

Zhang C C，Hu Q，Wu S，Chen F．Talanta，2020，217：121103.

Li G Y，Zou S S，Chao H，Ji L N．Sci. China Chem. 李观营，邹姗珊，巢晖，计亮年．中国科学：化学），2014，4：448－459.

Li B F，Zhou X M，Liu H X，Deng H P，Huang R，Xing D．ACS Appl. Mater. Interfaces，2018，10（5）：4494－4501.

Li G Y，Sun L L，Ji L N，Chao H．Dalton Trans.，2016，45（34）：13261－13276.

Tao Z Y，Lü Q L，Liu W P，Zhang P Y，Jin X X，Fang Q，Xia H．J. Trop. Dis. Par. 陶志勇，吕樵岚，刘韦萍，张培艺，靳小霞，方强，夏惠．热带病与寄生虫学），2021，19（1）：15－18.

Tan T W．Study on LAMP Method for On-site Detection of Bovine and Goat Derived Components in Milk and Dairy Products．Xi′an：Shaanxi University of Science & Technology（澹台玮．乳及乳制品中牛羊源性成分的现场LAMP检测方法研究．西安：陕西科技大学），2020.

Fu Z F，Wang X F，Xu J F，Li Y Y．J. Zhejiang Agric. Sci. （付振芳，汪小福，徐俊锋，李玥莹．浙江农业科学），2016，57（5）：725－729.

Seok Y，Yin Q T，Bai H W，Bau H H．Anal. Chem.，2022，94（3）：1778－1786.

Bekta A，Covington M F，Aidelberg G，Arce A，Jayaprakash A，Matute T，Nunez I，Walsh J，Boutboul D，Delaugerre C，Lindner A B，Federici F，Jayaprakash A D．Viruses－Basel，2021，13（5）：742.

Song H X，Liu J L，Xu Q F．J. Shaanxi Univ. Sci. （宋宏新，刘建兰，徐秦峰．陕西科技大学学报），2018，36（1）：34－38.

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

可视化辅助双碳点比率荧光检测水中银离子

爆炸物原料过氧化氢的比色和荧光可视化检测方法探讨

基于纳米金星的层析试纸条用于检测HIV-DNA

基于DNA模板合成的银簇建立“点亮型”荧光法检测卡那霉素