基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法

李艳伟; 王佳佳; 邢月婷; 郭春; 黄莹莹; 宋兴辉; 黄琼

doi:10.19969/j.fxcsxb.21101803

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法

实验技术与方法 | 更新时间：2022-07-15

- 基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法
- Study on a Cell Viability Detection Method after Flow Cytometric Sorting Based on Real-time Labeling-free Technique
- 分析测试学报 2022年41卷第7期页码：1084-1089
- 作者机构：
  
  浙江大学医学院公共技术平台，浙江杭州 310058
- 作者简介：
  
  李艳伟，硕士，助理研究员，研究方向：流式细胞分析及分选技术开发，E－mail：lywei@zju.edu.cn
- 基金信息：
  
  浙江省教育厅项目(Y201941524);浙江大学实验技术研究项目(SYB202130)
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.21101803
  中图分类号：
扫描看全文
李艳伟,王佳佳,邢月婷等.基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法[J].分析测试学报,2022,41(07):1084-1089.

LI Yan-wei,WANG Jia-jia,XING Yue-ting,et al.Study on a Cell Viability Detection Method after Flow Cytometric Sorting Based on Real-time Labeling-free Technique[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(07):1084-1089.
李艳伟,王佳佳,邢月婷等.基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法[J].分析测试学报,2022,41(07):1084-1089. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21101803.

LI Yan-wei,WANG Jia-jia,XING Yue-ting,et al.Study on a Cell Viability Detection Method after Flow Cytometric Sorting Based on Real-time Labeling-free Technique[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(07):1084-1089. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21101803.

摘要

利用流式细胞法、细胞计数试剂盒（CCK-8）法、实时细胞功能分析（RTCA）法分别检测分选前后细胞的活性，综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示，流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为（3.85 ± 0.008）%，分选前细胞凋亡率为（14.09 ± 0.021）%，分选后细胞凋亡率低于分选前，具有统计学差异（,P,<, 0.05）；分选前后的活细胞比例显示，分选后活细胞比例高于分选前，具有显著性统计学差异（,P,<, 0.001）。CCK-8法测得的分选后细胞活性高于分选前，具有显著性统计学差异（,P,<, 0.001）；RTCA法测得的分选后细胞连续增殖活性明显高于分选前，具有极显著性统计学差异（,P,<, 0.000 1）。结果显示，相较于CCK-8法和流式细胞法，RTCA法的细胞用量少、可回收，操作简便，无需标记，检测灵敏度高，可获得实时动态的细胞生长曲线，适合研究分选后细胞长效动态的活性变化，可为基础和临床分选后活细胞的功能研究提供检测手段。

Abstract

In this paper，flow cytometric analysis，cell counting kit-8（CCK-8） and real time cellular analysis（RTCA） were used to detect cell viability before and after flow cytometric sorting，respectively. The experimental operation and statistical analysis of the three methods were compared comprehensively. The result showed that the apoptosis percentages for cells determined by flow cytometric analysis were （3.85 ± 0.008）% in the group after sorting and （14.09 ± 0.021）% in the group before sorting. And the apoptosis percentage for cells after sorting was lower than that before sorting，with a statistical difference（,P,） less than 0.05. Further statistical analysis for the proportion of living cells before and after sorting showed that the proportion of living cells after sorting was higher than that before sorting，with a significant statistical difference（,P,） less than 0.001. The CCK-8 assay showed that the group after sorting had higher cell proliferation viability than the group before sorting（,P,<, 0.001）. RTCA assay showed a highly significant statistical difference（,P,<, 0.000 1） in the continuous proliferation activity of the cells after sorting. Compared to the assays of flow cytometric analysis and CCK-8，RTCA method has a low request of cell numbers，recyclable，easy operation，labeling-free，high detection sensitivity，which displays a real-time dynamic cell growth curve suitable for studying the long-term dynamic changes of cell viability after sorting. Furthermore，RTCA could be used as a method for the functional studies of cells after basic and clinical sorting.

关键词

实时细胞功能分析流式细胞分析流式细胞分选CCK-8细胞活性

Keywords

real time cellular analysisflow cytometric analysisflow cytometric sortingCCK-8cell viability

references

Jia Y R．China Med. Equip. （贾永蕊．中国医学装备），2010，7（4）：4－6.

Han G，Dong Y S，Wang H M，Wang Q J，Ding R G．J. Toxicol. （韩刚，董延生，王和枚，王全军，丁日高．毒理学杂志），2014，28（4）：326－330.

Adan A，Alizada G，Kiraz Y，Baran Y，Nalbant A．Crit. Rev. Biotechnol.，2017，37（2）：163－176.

Aghaeepour N，Finak G，Hoos H，Mosmann T R，Scheuermann R H．Nat. Methods，2013，10（3）： 228－238.

Givan A L．Methods Mol. Biol.，2011，699：1－29.

Song X H，Wang J J，Li Y W，Xing Y T，Guo C，Huang Y Y，Xu L T，Hu H，Wang L L．FEBS Open Bio.，2021，11（9）：2453－2467.

Liu Y，Wang L T，Liu F，Ran H Y．Sci. Adv. 刘洋，王丽婷，刘芳，冉海莹．科学咨询），2018，（1）：55－56.

Hu N L，Xu X X，Zou L Y，Zhao J P．China Med. Dev. Inf. Sep. （户乃丽，徐晓雪，邹林樾，赵军朋．中国医疗器械信息），2020，26（21）：19－21.

Ke N，Wang X，Xu X，Abassi Y A．Methods Mol. Biol.，2011，740： 33－43.

Kumar P，Nagarajan A，Uchil P D．Cold Spring Harb. Protoc.，2018，2018（6）：1－4.

Wang Y Y，Tan X Y，Hu M H，Ma F L，Huang Z Y，Liang J Q．Drug Eval. Res. （王园园，谭小燕，胡明华，马方励，黄芝瑛，梁金强．药物评价研究），2017，40（2）： 206－209.

Soboleski M R，Oaks J，Halford W P．FASEB J.，2005，19（3）： 440－442.

Zhang X C，Fu R，Zhao B P．J. Shanghai Jiaotong Univ. ：Med. Sci. （张小翠，符蓉，赵犇鹏．上海交通大学学报：医学版），2018，38（7）：845－850.

Yan G J，Pei Y F，Zhu Z H，Wu J Y，Pan J H．Chin. Pharm. J. （严国俊，裴燕芳，朱贞宏，吴洁颖，潘金火．中国药学杂志），2014，49（3）：169－173.

Lebourgeois S，Fraisse A，Hennechart－Collette C，Guillier L，Perelle S，Martin－Latil S．Front. Cell. Infect. Microbiol.，2018，8（335）：1－11.

Wallberg F，Tenev T，Meier P．Cold Spring Harb. Protoc.，2016，2016（4）：347－353.

Zhang W，Liang Z H．Chin. J. Cell. Mol. Immunol. （张伟，梁智辉．细胞与分子免疫学杂志），2014，30（11）：1209－1212.

Shao J L，Li L Q，Dai J X，Chen T T，Zhai L．Biotechnol. World（邵军丽，李林秋，戴娟秀，陈婷婷，翟璐．生物技术世界），2016，（5）：31－32.

Bonnier F，Keating M E，Wróbel T P，Majzner K，Baranska M，Garcia－Munoz A，Blanco A，Byrne H J．Toxicol. In Vitro，2015，29（1）：124－131.

Eilenberger C，Kratz S R A，Rothbauer M，Ehmoser E K，Ertl P，Küpcü S．MethodsX，2018，5：781－787.

Lomakina G Y，Modestova Y A，Ugarova N N．Biochemistry（Mosc），2015，80（6）：701－713.

Erkan M，Michalski C W，Rieder S，Reiser－Erkan C，Abiatari I，Kolb A，Giese N A，Esposito I，Friess H，Kleeff J. Clin. Gastroenterol. Hepatol.，2008，6（10）：1155－1161.

Xu D L，Si Y，Tian L，Xiao B，He Y Q，Zhu Y．J. Nanjing Med. Univ.：Nat. Sci. （徐大来，司远，田蕾，肖斌，何远清，朱毅．南京医科大学学报：自然科学版），2021，41（3）：355－360，414.

Gao J，Lin S，Zhang Q，Lin J，Zhang L H，Gu X Y，Shao H，Yao K Q，Duan S．Mod. Med. J. Chin.

高建，林圣，张倩，林洁，张玲华，古学英，邵豪，姚克勤，段山．中国现代医药杂志），2019，21（2）：1－4.

Jin Y X．The Drug Sensitivity Assessment of Prostate and Pancreatic Cancer Cells by Real-time Cell Analysis & Inhibitory Effect of Low Expression of Trim46 Gene on Proliferation and Migration of Pancreatic Cancer Cell Line Capan-2. Beijing：Peking Union Medical College（靳亚西．利用实时细胞分析技术检测前列腺与胰腺癌细胞药物敏感性及Trim46基因低表达对胰腺癌细胞Capan-2的增殖和迁移能力的抑制．北京：北京协和医学院），2017.

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

暂无数据