吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立

谢波; 柳心梅; 卢迪莎; 程勇健; 罗林; 肖治理

doi:10.19969/j.fxcsxb.21031001

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立

研究报告 | 更新时间：2023-02-13

- 吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立
- Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay
- 分析测试学报 2021年40卷第10期页码：1474-1481
- 作者机构：
  
  广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院，广东广州 510642
- 作者简介：
  
  肖治理，博士，副教授，研究方向：食品安全检测技术，E-mail：scau_xzl@163.com
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2018YFC1602903);广东省自然科学基金面上项目(2019A1515012107)
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.21031001
  中图分类号：
扫描看全文
谢波,柳心梅,卢迪莎等.吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立[J].分析测试学报,2021,40(10):1474-1481.

XIE Bo,LIU Xin-mei,LU Di-sha,et al.Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(10):1474-1481.
谢波,柳心梅,卢迪莎等.吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立[J].分析测试学报,2021,40(10):1474-1481. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21031001.

XIE Bo,LIU Xin-mei,LU Di-sha,et al.Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(10):1474-1481. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21031001.

摘要

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料，合成了吡虫啉半抗原，通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）偶联制备得到完全抗原，经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体，建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法（ic-CLEIA）。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件，最适条件为：包被原质量浓度62.50 ng/mL（稀释16 000倍），抗体质量浓度103.12 ng/mL（稀释64 000倍），缓冲液PBS（pH 7.4），抗原与抗体竞争反应时间30 min，酶标二抗稀释倍数1∶7 000。结果表明，在最适条件下该方法的检出限（IC,10,）为0.03 ng/mL，IC,50,为0.57 ng/mL，线性检测范围（IC,20, ~ IC,80,）为0.083 ~ 3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%，与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0% ~ 112%，相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好（,r,2, = 0.989）。结果表明，所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点，可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。

Abstract

An indirect competitive chemiluminescence immunoassay（ic-CLEIA） was established for the detection of imidacloprid based on monoclonal antibody．Firstly，the imidacloprid haptens were synthesized with imidacloprid and 3-mercaptopropionic acid，then the haptens were coupled with carrier protein KLH and BSA by active ester method to prepare complete antigens．The complete antigens were used to immunize Balb/c female mice，and their spleen cells were fused with myeloma cells to prepare monoclonal antibody．The conditions of the method such as dilution multiple of coating antigen and antibody，category of buffer，pH of buffer，competition reaction time of primary antibody，and dilution multiple of enzyme-labeled secondary antibody were optimized．The optimum conditions were as follows：a 62.50 ng/mL of coating antigen（dilute 16 000 times），a 103.12 ng/mL of antibody（dilute 64 000 times），a PBS buffer（pH 7.4），a 30 min of the primary antibody competition reaction time and a 7 000-fold dilution of the secondary antibody．Results showed that under the optimal conditions，the detection limit（IC,10,） of the method was 0.03 ng/mL，IC,50, was 0.57 ng/mL，and the linear detection range（IC,20,－IC,80,） was 0.083－3.99 ng/mL．The cross-reaction rate with imidaclothiz was 2.2%，and no obvious cross reaction was observed with 5 structural analogues i.e.clothianidin，dinotefuran，acetamiprid，thiacloprid and thiamethoxam．The spiked recoveries for cucumber and apple samples ranged from 82.0% to 112%，with relative standard deviations below 15%．The detection results for real sample has good correlation with those of HPLC method（,r,2, = 0.989），indicating that the established ic-CLEIA method could be applied to detect imidacloprid residues in food with high specificity and sensitivity．

关键词

吡虫啉单克隆抗体间接竞争化学发光酶联免疫分析

Keywords

imidaclopridmonoclonal antibodyindirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunoassay（ic-CLEIA）

references

Lee J K，Anh K C，Park O S，Kang S Y，Hammock B D．Agric. Food Chem.，2001，49（5）：2159－2167．

Ding S W，Zhang P．Mod. Agric. Technol. （丁绍武，张鹏．现代农业科技），2019，19（3）：121－123．

Lee K L，You M L，Tsai C H，Lin E H，Hsieh S Y，Ho M H，Hsu J C．Biosens. Bioelectron.，2016，75（16）：88－95．

Yao L J．Rapid Immunoassay for Imidacloprid，Acetamiprid，Carbofuran and Aldicarb．Wuxi：Jiangnan University（姚蕾珺．吡虫啉、啶虫脒、克百威及涕灭威的免疫快速检测．无锡：江南大学），2017．

Tan Y，Zhang Q，Zhao C，Wang X Y，Li J Y，Wang D，Zhou Y，Lu X X．Asian J. Ecotoxicol. 谭颖，张琪，赵成，王心怡，李敬尧，王丹，周萤，卢晓霞．生态毒理学报），2016，11（6）：67－81．

Zhang Q，Wang X M，Li Z，Hang B J，Zheng B L，Chang Y，Huang Y F．Environ. Pollut.，2018，240：647－652．

Wang R，Wang Z，Hong Y，Wang Y，Deng A．J. Sci. Food Agric.，2012，92（6）：1253－1260．

Lonare M，Kumar M，Raut S．Food Chem. Toxicol.，2011，49（12）：3086－3089．

GB 2763－2019．National Food Safety Standard—Maximum Residue Limits for Pesticides in Food．National Standards of the People’s Republic of China（食品安全国家标准——食品中农药最大残留限量．中华人民共和国国家标准）．

Gao Y L，Liu S B，Sun P．J. Heilongjiang Bayi Land Reclamat. Univ. （高玉玲，刘少彬，孙鹏．黑龙江八一农垦大学学报），2018，30（1）：33－37．

Gao R，Zhao R Z，Xiao H．Mod. Agrochem.，2004，3（6）：21－23．

Zhang Z K，Li S N，Zhang R，Nan N L，Qian F L，Yang C X．J. Northwest A＆F Univ.：Nat. Sci. Ed.，2010，38（3）：139－144．

Fang Q K．Study on the Immunoassay Method for Two Pesticide Residues of Butacarb and Imidacloprid．Nanjing：Nanjing Agricultural College（方庆葵．丁酮威和吡虫啉两种农药残留免疫分析方法的研究．南京：南京农业大学），2015．

Lou X H，Gao C C，Zhu W J，Ba J S，Mo D M．J. Food Saf. Qual. （楼小华，高川川，朱文静，巴金沙，莫冬梅．食品安全质量检测学报），2017，8（5）：1739－1744．

Li G L，Jiang J Q，Chen X L，Zhang S J，Wang Z L．Food Sci. （李广领，姜金庆，陈锡岭，张淑静，王自良．食品科学），2011，32（12）：228－233．

Ma Y S，Feng C W，Jia F F，Feng J，Yang S．Shandong Anim. Husb. Vet. （马寅生，冯才伟，贾芳芳，冯静，杨烁．山东畜牧兽医），2013，34（5）：6－8．

Xu Y，Zou L，Liu S W，Liu J，Chen B．Chin. J. Anal. Chem. （许杨，邹龙，刘师文，刘京，陈波．分析化学），2012，84（1）：216－222．

Xu X X，Su X N，Tan S，Zhong C L，Zeng D P，Zhang Y，Xu Z L，Wang X，Yang J Y．Food Sci. 许小炫，苏晓娜，谭庶，钟翠丽，曾道平，张燕，徐振林，王序，杨金易．食品科学），2020，55（1）：15－23．

Li G，Ji X Y，Qian G L，Hua X D，Qin N，Wang J，Liu F Q．J. Bioeng. 李刚，纪宪勇，钱国良，华修德，秦娜，王杰，刘凤权．生物工程学报），2011，27（6）：943－951．

Xiao Z L，Wang H，Shen Y D，Lei H T，Wu Q，Yang J Y，Sun Y M．Mod. Food Sci. Technol. 肖治理，王弘，沈玉栋，雷红涛，吴青，杨金易，孙远明．现代食品科技），2012，28（8）：975－978．

Guo N F，Yu J C，Guo X R，Xu M L，Dang Y L，Fan Y M．J. Food Biol. Technol. （郭乃菲，于基成，郭小瑞，徐美玲，党亚丽，范永梅．食品生物与技术学报），2014，33（5）：517－521．

Sun Y N，Teng M，Hu X F，Hou Y Z，Chai S J，Liu Q T．Food Sci. （孙亚宁，滕蔓，胡骁飞，侯玉泽，柴书军，刘庆堂．食品科学），2011，32（9）：236－240．

Guo Y R，Zou R B，Si F F，Liang W L．Food Chem.，2020，335（2021）：1－9．

Wang Z P，Wen K，Zhang X Y，Li X M，Wang Z H，Shen J Z，Ding S Y．J. Anal. Sci.，2017，23（5）：302－308．

Gao B L．Preparation of Phenothiazine Drugs Broad-spectrum Monoclonal Antibody and Amoxicillin Single-chain Antibody．Baoding：Hebei Agricultural University（高宝龙．吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体及阿莫西林单链抗体的制备．保定：河北农业大学），2015．

Xu H．Study on the Rapid Detection of Chloramphenicol Residues in Food by Colloidal Gold Immunochromatographic Method．Guangzhou：Guangdong College of Pharmacy（徐欢．胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究．广州：广东药学院），2010．

Pouletty P．Methods Mol. Biol.，2015，45：69－78．

Tian W．Study on Immunoassay Method of Pyrimidinhos-methyl and Cadmium in Food．Guangzhou：South China Agricultural University（田巍．粮食中甲基嘧啶磷和镉免疫分析方法研究．广州：华南农业大学），2018．

Zhu F．Preparation of Alternaria Alternaria Polyclonal Antibody and Study on Its Immunoassay Method．Guangzhou：South China Agricultural University（朱帆．链格孢酚多克隆抗体的制备及其免疫分析方法的研究．广州：华南农业大学），2016．

Fan Y M，Gu X J，Yu X J，Wang S J．J. Anal. Sci. （樊苑牧，顾晓俊，俞雪钧，王时杰．分析科学学报），2006，23（5）：583－584．

Yu X D，Li Y S，Si C C，Liu Y，Guan N Y，Zhang S L，Zhou Y．J. Yangzhou Univ. （于祥东，李岩松，司朝朝，刘琰，关乃瑜，张胜兰，周玉．扬州大学学报），2019，40（2）：107－112．

Kim H J，Shelver W L，Li Q X．Anal. Chim. Acta，2004，509（1）：111－118．

Guo Y R，Zou R B，Si F F，Liang W L，Zhang T Y，Chang Y Y，Qiao X S，Zhao J H．Food Chem.，2020，335（2021）：1－9．

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

胶体金免疫层析法快速检测水产品中河豚毒素的研究

水果及环境水样中苯醚甲环唑的高灵敏免疫分析方法研究

稻瘟灵单克隆抗体的制备及评价

基于高特异性单克隆抗体的间接竞争ELISA检测食品中胭脂红的研究