畜禽肉及饲料中氟苯尼考残留免疫分析方法研究

谢美婵; 杨金易; 李然; 肖治理; 王弘; 徐振林; 孙远明; 沈玉栋

doi:10.19969/j.fxcsxb.20120801

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畜禽肉及饲料中氟苯尼考残留免疫分析方法研究

实验技术与方法 | 更新时间：2023-02-13

- 畜禽肉及饲料中氟苯尼考残留免疫分析方法研究
- Study on a Monoclonal Antibody-based Immunoassay Method for Florfenicol in Animal Meat and Feed
- 分析测试学报 2021年40卷第9期页码：1380-1385
- 作者机构：
  
  华南农业大学食品学院/广东省食品质量安全重点实验室，广东广州 510642
- 作者简介：
  
  沈玉栋，博士，教授，研究方向：食品安全，E-mail： shenyudong@scau.edu.cn
- 基金信息：
  
  十三五国家重点研发计划课题(2018YFC1602904);国家自然科学基金资助项目(31871887);广东省基础与应用基础研究项目(2019B1515210025;2020A1515011238;2018B030314005);广东省企业科技特派员项目(GDKTP2020055300)
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.20120801
  中图分类号：
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谢美婵,杨金易,李然等.畜禽肉及饲料中氟苯尼考残留免疫分析方法研究[J].分析测试学报,2021,40(09):1380-1385.

XIE Mei-chan,YANG Jin-yi,LI Ran,et al.Study on a Monoclonal Antibody-based Immunoassay Method for Florfenicol in Animal Meat and Feed[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(09):1380-1385.
谢美婵,杨金易,李然等.畜禽肉及饲料中氟苯尼考残留免疫分析方法研究[J].分析测试学报,2021,40(09):1380-1385. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.20120801.

XIE Mei-chan,YANG Jin-yi,LI Ran,et al.Study on a Monoclonal Antibody-based Immunoassay Method for Florfenicol in Animal Meat and Feed[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(09):1380-1385. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.20120801.

摘要

针对动物源性食品及饲料中氟苯尼考的残留问题，通过抗原制备、动物免疫和细胞融合筛选，成功得到可高特异性识别氟苯尼考的单克隆抗体，并建立了氟苯尼考的间接竞争酶联免疫分析（icELISA）方法。经单因素实验优化策略，确定最佳反应条件为：包被抗原质量浓度0.05 μg/mL，抗体质量浓度为0.1 μg/mL，最佳药物、抗体和二抗稀释液均为磷酸缓冲液（PBST），抗体稀释液吐温－20含量0.05%，竞争反应时间30 min，二抗质量浓度为0.167 μg/mL，二抗反应时间30 min。在该条件下，建立了氟苯尼考的icELISA 检测方法，其IC,50,为9.48 ng/mL，线性检测范围为1.75 ~ 51.36 ng/mL，检出限（LOD）达0.64 ng/mL，且与氯霉素等结构及功能类似物均无明显交叉反应，特异性良好。实际样品的加标回收率为88.1% ~ 107%，相对标准偏差（RSD）,<, 15%。将所建立的方法用于畜禽肉及饲料样品的检测，结果与HPLC－MS/MS判定结果一致，说明该方法适用于畜禽产品及饲料中氟苯尼考的残留检测。

Abstract

To monitor florfenicol residues in animal-derived foods and feeds， a monoclonal antibody with excellent specificity and sensitivity was prepared by using the antigen reported previously to immunize BALB/c mice and hybridoma technique. An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay was established based on this antibody. The optimal conditions were finalized as follows： a coating antigen concentration of 0.05 μg/mL， an antibody concentration of 0.1 μg/mL， a competition reaction time of 30 min， a PBST diluent for analyte， primary antibody and secondary antibody with a Tween－20 of 0.05%， a secondary antibody concentration of 0.167 μg/mL and its reaction time of 30 min. Under the optimal conditions， the icELISA method for detection of florfenicol was established with an IC,50, of 9.48 ng/mL， a linear range of 1.75－51.36 ng/mL and a limit of detection（LOD）of 0.64 ng/mL. There was no obvious cross-reactivity between the icELISA and its structural and functional analogs such as chloramphenicol， thiamphenicol， etc. The spiked recoveries for florfenicol in samples ranged from 88.1% to 107% with relative standard deviations（RSDs）less than 15%. The developed icELISA method was used to detect fifteen blind samples， of which four blind samples were found to contain florfenicol in different concentrations levels. These results were in good agreement with those of HPLC－MS/MS. Therefore， the developed icELISA exhibited a potential practicality in detection of florfenicol in animal meat and feed samples.

关键词

氟苯尼考畜禽肉及饲料单克隆抗体免疫分析

Keywords

florfenicolanimal meat and feedmonoclonal antibodyimmunoassay

references

Li X B， Shi B， Liang P. Animal Sci. Abroad（李秀波，石波，梁萍. 国外畜牧科技）， 1999， 26（3）： 50－52.

Miu X Q， Song Y P， Huang X H， Zeng Z L. Chin. J. Vet. Drug（缪小群，宋冶萍，黄显会，曾振灵. 中国兽药杂志），2006， 40（8）： 52－55.

Hu D F， Han Z Q， Li C L， Lü L， Cheng Z L， Liu S D. Immunopharmacol. Immunotoxicol.， 2016， 38（6）： 472－485.

He M， Lu S M， Li Y L. Chin. J. Vet. Drug（何敏，卢胜明，李英伦. 中国兽药杂志）， 2005， 39（6）： 38－41.

GB 31650－2019. National Food Safety Standard－Maximum Residue Limits for Veterinary Drugs in Foods. National Standards of the People's Republic of China（食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量. 中华人民共和国国家标准）.

Luo Q， Zhong M S， Zhu P L， Fang L， Liu W J. J. Food Saf. Qual.（罗钦，钟茂生，朱品玲，方灵，刘文静. 食品安全质量检测学报）， 2020， 11（22）： 8253－8259.

Ma W J， Xu X Y， Mao Q， An B Y， Huo M X， Wang H Y， Tao Y F， Liu Z L， Huang L L. Chin. J. Vet. Drug（马文瑾，徐向月，毛倩，安博宇，霍美霞，王涵宇，陶燕飞，刘振利，黄玲利. 中国兽药杂志）， 2020， 54（8）： 26－33.

Yang Q H， Ai X H， Li R， Liu Y T. Chin. J. Anal. Lab.（杨秋红，艾晓辉，李荣，刘永涛. 分析试验室）， 2015， 34（5）： 533－537.

Yikilmaz Y， Filazi A. Food Anal. Methods， 2015， 8（4）： 1027－1033.

Qu Q Y， Chen S S， Liu X W， Zhang Q， Li P W. J. Instrum. Anal.（瞿巧钰，陈珊珊，刘潇威，张奇，李培武. 分析测试学报）， 2014， 33（6）： 628－634.

Guo L L， Song S S， Liu L Q， Peng J， Kuang H， Xu C L. Biomed. Chromatogr.， 2015， 29（9）： 1432－1439.

Tao X Q， Jiang H Y， Yu X Z， Zhu J H， Wang X， Wang Z H， Niu L L， Wu X P， Shen J Z. Food Addit. Contam. A， 2013， 30（5）： 804－812.

Liu Z H， Huang Y L， Wang X， Jin Y Z， Wang H J， Ye N， Liu Q， Zhang C M. Chin. J. Vet. Drug（刘智宏，黄耀凌，汪霞，金银珍，王鹤佳，叶妮，刘琪，张聪敏. 中国兽药杂志）， 2010， 44（12）： 1－5.

Sun F L， Diao Y X， Sun N， Ma Y F， Ji W. Sci. Agric. Sin.（孙法良，刁有祥，孙宁，马艳芳，纪巍. 中国农业科学），2009， 42（5）： 1813－1819.

Li R， Lin Z J， Yang J Y， Xu Z L， Wang H， Lei H T， Sun Y M， Shen Y D. Chin. J. Anal. Chem.， 2018， 46（8）： 1321－1328.

Xiao Z L， Wang H， Shen Y D， Lei H T， Wu Q， Yang J Y， Sun Y M. Mod. Food Sci. Technol.（肖治理，王弘，沈玉栋，雷红涛，吴青，杨金易，孙远明. 现代食品科技）， 2012， 28（8）： 975－978.

Luo L， Xu Z L， Yang J Y， Xiao Z L， Li Y J， Beier R C， Sun Y M， Lei H T， Wang H， Shen Y D. J. Agric. Food Chem.， 2014， 62（51）： 12299－12308.

Huang J X， Yao C Y， Yang J Y， Li Z F， He F， Tian Y X， Wang H， Xu Z L， Shen Y D. Biomolecules， 2019， 9（12）： 770.

Chen Z J， Liu X X， Xiao Z L， Fu H J， Huang Y P， Huang S Y， Shen Y D， He F， Yang X X， Hammock B， Xu Z L. Ecotoxicol. Environ. Saf.， 2020， 196： 110533.

Xiao Z L， Wang Y， Shen Y D， Xu Z L， Dong J X， Wang H， Chen S T， Wang F， Yang J Y， Lei H T， Sun Y M. Food Anal. Methods， 2018， 11（3）： 635－645.

He F， Zou T T， Yang J Y， Wang H， Deng L H， Tian Y X， Xu Z L， Sun Y M， Lei H T， Tan X C， Shen Y D. Food Agric. Immunol.， 2019， 30（1）： 349－368.

SN/T 1865－2016. Determination of Thiamphenicol， Florfenicol and Florfenicol Amine Residues in Animal-derived Food for Export—LC－MS/MS Method. The State Administration for Entry－Exit Inspection and Quarantine of the People's Republic of China（出口动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺残留量的测定液相色谱－质谱/质谱法. 中华人民共和国国家标准）.

2483－8－2016. Determination of Chloramphenicol， Thiamphenicol and Florfenicol in Feeds—Liquid Chromatography－Tandem Mass Spectrometry. National Standards of the People's Republic of China（饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定液相色谱－串联质谱法. 中华人民共和国国家标准）.

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