建立了同时快速筛查和确证马饲料中39种赛马违禁药物(包含抗心率失常类药物、抗惊厥类药物、止痉挛类药物、抗疟疾类药物、刺激剂、麻醉剂及大麻酚类药物)的液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法。样品粉碎后分别经1 mmol/L HClO4溶液和酸化乙腈溶液提取，并通过混合型固相萃取柱净化。采用Agilent Zorbax SB(10.0 cm×2.1 mm i.d.，3.5 μm) 色谱柱，以0.4%甲酸水溶液和0.4%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱，正离子多反应监测(MRM) 模式下检测。方法对空白饲料3个加标水平下的平均回收率为58%~116%，相对标准偏差为1.6%~20.4%，各类药物线性良好(r2＞0.99)。方法检出限(S/N≥3)和定量下限(S/N≥10)分别为0.2~25.0 μg/kg和1.0~40.0 μg/kg，其中超过67%药物的检出限在2.5 μg/kg以下。实验结果表明，该方法分析时间短，灵敏度、精密度良好，适用于马饲料中上述几类药物的快速筛查和测定。