Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay Method for Detection of Tiamulin Residues in Eggs

LI Lu; YANG Jin⁃yi; WANG Yu; ZHANG Zheng; YUAN Ting⁃ting; XIAO Yi⁃mei; XU Zhen⁃lin; SHEN Yu⁃dong

doi:10.19969/j.fxcsxb.21092903

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Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay Method for Detection of Tiamulin Residues in Eggs

Scientific Papers | 更新时间：2023-01-04

- Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay Method for Detection of Tiamulin Residues in Eggs
- Journal of Instrumental Analysis Vol. 41, Issue 1, Pages: 115-120(2022)
- 作者机构：
  
  1.华南农业大学食品学院广东省食品质量安全重点实验室，广东广州 510642
  2.广州市食品检验所，广东广州 510410
  3.深圳凯吉星农产品检测认证有限公司，广东深圳 518000
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.21092903
  CLC：
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李露,杨金易,王宇等.鸡蛋中泰妙菌素化学发光酶免疫分析方法研究[J].分析测试学报,2022,41(01):115-120.

LI Lu,YANG Jin⁃yi,WANG Yu,et al.Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay Method for Detection of Tiamulin Residues in Eggs[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(01):115-120.
李露,杨金易,王宇等.鸡蛋中泰妙菌素化学发光酶免疫分析方法研究[J].分析测试学报,2022,41(01):115-120. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21092903.

LI Lu,YANG Jin⁃yi,WANG Yu,et al.Development of a Chemiluminescence Enzyme Immunoassay Method for Detection of Tiamulin Residues in Eggs[J].Journal of Instrumental Analysis,2022,41(01):115-120. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21092903.

摘要

针对鸡蛋中泰妙菌素的残留问题，通过半抗原及抗原设计合成、动物免疫及细胞融合筛选，成功得到可特异、灵敏识别泰妙菌素的单克隆抗体，并建立了泰妙菌素的化学发光酶免疫分析方法（CLEIA）。采用棋盘法结合单因素实验优化策略，确定最佳反应条件为：包被原质量浓度0.26 µg/mL，抗体质量浓度0.94 µg/mL，反应体系为0.02 mol/L的PBS（pH 7.4）缓冲液，酶标二抗质量浓度及其稀释液和反应时间分别为2 μg/mL、PBST和40 min。在该条件下，建立了泰妙菌素的CLEIA方法，其IC,50,为0.54 ng/mL，检出限（LOD，IC,10,）为0.03 ng/mL，线性检测范围（IC,20,～IC,80,）为0.17～1.74 ng/mL，且与其它功能结构类似物无明显交叉反应，特异性良好。将建立的CLEIA方法用于鸡蛋实际样品的检测，加标回收率为100%～118%，相对标准偏差（RSD）小于10%，结果与HPLC－MS/MS（,r,2, = 0.998 7）一致，表明该方法适用于鸡蛋样品中泰妙菌素残留的快速筛查。

Abstract

A chemiluminescence enzyme immunoassay（CLEIA） method was established for the monitoring of tiamulin residues in egg samples，based on a monoclonal antibody with excellent specificity and sensitivity obtained by synthesizing antigen to immunize BALB/c mice and cell experiments.The optimal conditions were finalized as follows：the coating antigen concentration：0.26 μg/mL，the antibody concentration：0.94 µg/mL，the reaction buffer system：PBS（0.02 mol/L，pH 7.4），and the dilution buffer，the concentration and the reaction time for the enzyme-labeled secondary antibody were PBST buffer，2 µg/mL and 40 min，respectively.Under the optimal conditions，a CLEIA method for tiamulin detection was established，with an IC,50, of 0.54 ng/mL，a limit of detection（LOD，IC,10,） of 0.03 ng/mL，and a linear detection range （IC,20,-IC,80,） of 0.17－1.74 ng/mL.There was no obvious cross-reaction between the method and the other structural and functional analogs of tiamulin.The CLEIA method was used for the detection of real egg samples.The spiked recoveries ranged from 100% to 118%，with the relative standard deviations（RSDs） less than 10%. The test results of the developed CLEIA had a good correlation with those of HPLC－MS/MS（,r,2, = 0.998 7），indicating that the method was suitable for the detection of tiamulin residues in egg samples.

关键词

泰妙菌素鸡蛋单克隆抗体化学发光酶免疫分析方法（CLEIA）

Keywords

tiamulineggmonoclonal antibodychemiluminescene enzyme immunoassay（CLEIA）

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