Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay

XIE Bo; LIU Xin-mei; LU Di-sha; CHENG Yong-jian; LUO Lin; XIAO Zhi-li

doi:10.19969/j.fxcsxb.21031001

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Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay

Scientific Papers | 更新时间：2023-02-13

- Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay
- Journal of Instrumental Analysis Vol. 40, Issue 10, Pages: 1474-1481(2021)
- 作者机构：
  
  广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院，广东广州 510642
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.19969/j.fxcsxb.21031001
  CLC：
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谢波,柳心梅,卢迪莎等.吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立[J].分析测试学报,2021,40(10):1474-1481.

XIE Bo,LIU Xin-mei,LU Di-sha,et al.Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(10):1474-1481.
谢波,柳心梅,卢迪莎等.吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立[J].分析测试学报,2021,40(10):1474-1481. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21031001.

XIE Bo,LIU Xin-mei,LU Di-sha,et al.Preparation of an Anti-imidacloprid Monoclonal Antibody and Its Indirect Competitive Chemiluminescence Enzyme-linked Immunoassay[J].Journal of Instrumental Analysis,2021,40(10):1474-1481. DOI： 10.19969/j.fxcsxb.21031001.

摘要

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料，合成了吡虫啉半抗原，通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）偶联制备得到完全抗原，经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体，建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法（ic-CLEIA）。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件，最适条件为：包被原质量浓度62.50 ng/mL（稀释16 000倍），抗体质量浓度103.12 ng/mL（稀释64 000倍），缓冲液PBS（pH 7.4），抗原与抗体竞争反应时间30 min，酶标二抗稀释倍数1∶7 000。结果表明，在最适条件下该方法的检出限（IC,10,）为0.03 ng/mL，IC,50,为0.57 ng/mL，线性检测范围（IC,20, ~ IC,80,）为0.083 ~ 3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%，与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0% ~ 112%，相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好（,r,2, = 0.989）。结果表明，所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点，可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。

Abstract

An indirect competitive chemiluminescence immunoassay（ic-CLEIA） was established for the detection of imidacloprid based on monoclonal antibody．Firstly，the imidacloprid haptens were synthesized with imidacloprid and 3-mercaptopropionic acid，then the haptens were coupled with carrier protein KLH and BSA by active ester method to prepare complete antigens．The complete antigens were used to immunize Balb/c female mice，and their spleen cells were fused with myeloma cells to prepare monoclonal antibody．The conditions of the method such as dilution multiple of coating antigen and antibody，category of buffer，pH of buffer，competition reaction time of primary antibody，and dilution multiple of enzyme-labeled secondary antibody were optimized．The optimum conditions were as follows：a 62.50 ng/mL of coating antigen（dilute 16 000 times），a 103.12 ng/mL of antibody（dilute 64 000 times），a PBS buffer（pH 7.4），a 30 min of the primary antibody competition reaction time and a 7 000-fold dilution of the secondary antibody．Results showed that under the optimal conditions，the detection limit（IC,10,） of the method was 0.03 ng/mL，IC,50, was 0.57 ng/mL，and the linear detection range（IC,20,－IC,80,） was 0.083－3.99 ng/mL．The cross-reaction rate with imidaclothiz was 2.2%，and no obvious cross reaction was observed with 5 structural analogues i.e.clothianidin，dinotefuran，acetamiprid，thiacloprid and thiamethoxam．The spiked recoveries for cucumber and apple samples ranged from 82.0% to 112%，with relative standard deviations below 15%．The detection results for real sample has good correlation with those of HPLC method（,r,2, = 0.989），indicating that the established ic-CLEIA method could be applied to detect imidacloprid residues in food with high specificity and sensitivity．

关键词

吡虫啉单克隆抗体间接竞争化学发光酶联免疫分析

Keywords

imidaclopridmonoclonal antibodyindirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunoassay（ic-CLEIA）

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