Determination of 13 Heparan Sulfate Disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 Cells Tumor Bearing Mice with Pancreatic Cancer by Precolumn Derivatization/High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection

ZHANG Lei; WANG Si-ya; ZHANG Yun-tao; REN Qiang

doi:10.12452/j.fxcsxb.240913396

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Determination of 13 Heparan Sulfate Disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 Cells Tumor Bearing Mice with Pancreatic Cancer by Precolumn Derivatization/High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection

Scientific Papers | 更新时间：2025-05-09

- Determination of 13 Heparan Sulfate Disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 Cells Tumor Bearing Mice with Pancreatic Cancer by Precolumn Derivatization/High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection
- Journal of Instrumental Analysis Vol. 44, Issue 5, Pages: 811-821(2025)
- 作者机构：
  
  1.山东第一医科大学药学院，山东济南 250000
  2.济宁医学院药学院，山东日照 276826
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.12452/j.fxcsxb.240913396
  CLC： O657.7;R914.1
- Received：13 September 2024，
  
  Revised：05 December 2024，
  
  Accepted：2024-12-16，
  
  Published：15 May 2025
- 稿件说明：
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张蕾,王思亚,张运涛,任强.柱前衍生/高效液相色谱-荧光检测法测定胰腺癌PANC-1和CFPAC-1细胞荷瘤小鼠中13种硫酸乙酰肝素二糖[J].分析测试学报,2025,44(05):811-821.

ZHANG Lei,WANG Si-ya,ZHANG Yun-tao,REN Qiang.Determination of 13 Heparan Sulfate Disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 Cells Tumor Bearing Mice with Pancreatic Cancer by Precolumn Derivatization/High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection[J].Journal of Instrumental Analysis,2025,44(05):811-821.
张蕾,王思亚,张运涛,任强.柱前衍生/高效液相色谱-荧光检测法测定胰腺癌PANC-1和CFPAC-1细胞荷瘤小鼠中13种硫酸乙酰肝素二糖[J].分析测试学报,2025,44(05):811-821. DOI： 10.12452/j.fxcsxb.240913396.

ZHANG Lei,WANG Si-ya,ZHANG Yun-tao,REN Qiang.Determination of 13 Heparan Sulfate Disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 Cells Tumor Bearing Mice with Pancreatic Cancer by Precolumn Derivatization/High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection[J].Journal of Instrumental Analysis,2025,44(05):811-821. DOI： 10.12452/j.fxcsxb.240913396.

摘要

建立了胰腺癌PANC-1、CFPAC-1细胞荷瘤小鼠中13种硫酸乙酰肝素（HS）二糖的柱前衍生/高效液相色谱-荧光检测方法。胰腺癌肿瘤样本经脱脂、蛋白酶酶解等前处理得到HS二糖后，与2-氨基吖啶酮（AMAC）衍生化试剂反应。通过Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C

色谱柱分离，以甲醇-60 mmol/L乙酸铵（pH 5.6）为流动相梯度洗脱，在激发波长425 nm、发射波长520 nm下检测。结果表明，13种HS二糖在各自质量浓度范围内线性关系良好（

≥0.999 0），检出限（LOD）为0.012~0.313 µg/mL，定量下限（LOQ）为0.117~1.250 µg/mL，精密度的相对标准偏差（RSD）为0.040%~0.63%，日内稳定性RSD为0.34%~3.6%，日间稳定性RSD为1.8%~6.4%，加标回收率为80.7%~109%，RSD为0.50%~17%。两种胰腺癌细胞荷瘤小鼠肿瘤组织中均检测出9种HS二糖，其中ΔUA-GlcN（ⅣH）占比最高，分别为28 627.558 nmol/g和66 938.786 nmol/g，ΔUA-GlcNAc（ⅣA）和ΔUA-GlcN，6S（ⅡH）占比次之。分子对接结果表明ⅣH与肝素结合性表皮生长因子（HB-EGF）结合力最强，ⅡH与成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）结合力最强。HS硫酸酯化序列的特点以及与HB-EGF和FGF-2之间的相互作用，调控胰腺癌的发生、发展过程。研究结果可为胰腺癌的早期治疗和诊断提供帮助。

Abstract

A precolumn derivatization/high performance liquid chromatography-fluorescence detection（HPLC-FLD） method for the determination of 13 heparan sulfate（HS） disaccharides in PANC-1 and CFPAC-1 cells tumor bearing mice with pancreatic cancer was established. HS disaccharides were obtained from pancreatic cancer samples by defatting and protease enzymatic hydrolysis，and then reacted with 2-aminoacridone（AMAC） derived reagents. The separation was performed by Thermo Scien

tific HYRERSIL ODS-2 C

column，and the mobile phase gradient elution was performed with methanol-60 mmol/L ammonium acetate（pH 5.6） at excitation wavelength of 425 nm and emission wavelength of 520 nm. The results showed that the 13 HS disaccharides had a good linear relationship within the corresponding mass concentration ranges（

≥0.999 0），with detection limits（LODs） of 0.012-0.313 µg/mL and the quantitation limits（LOQs） of 0.117-1.250 µg/mL. The relative standard deviations（RSDs） of precision ranged from 0.040% to 0.63%，the RSD of intra-day stability ranged from 0.34% to 3.6%，the RSD of inter-day stability ranged from 1.8% to 6.4%. The recoveries ranged from 80.7%-109%，and RSD was 0.50%-17%. 9 HS disaccharides were detected in the tumor tissue of the two types of pancreatic cancer cells，among which ΔUA-GlcN（ⅣH） accounted for the highest proportion，with concentrations of 28 627.558 nmol/g and 66 938.786 nmol/g，respectively. ΔUA-GlcNAc（ⅣA） and ΔUA-GlcN，6S（ⅡH） took the second place，and the results of molecular docking showed that ⅣH had the strongest binding force with heparin-binding epidermal growth factor（HB-EGF） and ⅡH had the strongest binding force with fibroblast growth factor-2（FGF-2）. The characteristics of HS sulfated sequence and its interaction with HB-EGF and FGF-2 regulate the occurrence and development of pancreatic cancer. The findings of this study may provide valuable insights for the early treatment and diagnosis of pancreatic cancer.

关键词

Keywords

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