采用液相色谱-电喷雾串联质谱仪(LC-ESIMS/MS),在多反应监测(MRM)模式下建立了动物尿液中15种甾类同化激素(睾酮、孕酮、诺龙、甲基睾酮、丙酸睾酮、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、大力补、勃地龙、群勃龙、康力龙、醋酸群勃龙、甲炔诺酮、甲羟孕酮、醋酸甲羟孕酮)的快速确证测定方法。试样经酶解处理后,过C18固相萃取柱净化,氮吹至干,残余物用0.50 mL乙腈-水(体积比1∶1)溶解后测定。采用正离子扫描方式进行仪器方法学研究,确定监测离子对,进行MRM模式定性定量分析。该方法的检出限(LOD)为0.2,0,.5μg/L,定量下限(LOQ)为0.5,1,.0μg/L;在2.0,2,00.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.998。在1.0、5.0μg/L的添加水平上,上述15种激素的平均回收率为59%,1,18%,相对标准偏差为1.0%,1,1.2%。该法操作简单,灵敏度高,可用于动物尿液中15种甾类同化激素的测定。