建立了化妆品中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、甲烯土霉素、去甲基金霉素、二甲胺四环素、脱水四环素和差相四环素含量的液相色谱串联质谱测定方法。对提取溶剂、流动相、流动相的梯度以及质谱参数进行了研究。采用乙腈-甲醇-草酸水溶液提取,LC-MS/MS分离测定,样品中被测物与干扰物能得到良好的分离。甲烯土霉素、去甲基金霉素在0.05,1,0.0 mg/L范围内其质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系,其余7种化合物在0.01,1,0.0 mg/L范围内其质量浓度与峰面积呈良好的线性关系。添加1.0,5,0.0 mg/kg时的加标回收率为73%,9,9%,相对标准偏差低于13.2%。该法简便、快速、准确,可用于化妆品中上述9种四环素类药物的定性、定量检测。