Se estableció un método de análisis para 12 nucleósidos normales y modificados en ARNm de células tumorales. Tras la extracción del ARN total de las muestras de células tumorales, la purificación del ARNm y la hidrólisis del ARNm, se agregó 8-bromoguanosina (8Br-G) como estándar interno. Utilizando soluciones acuosas al 0.1% de ácido fórmico y soluciones de metanol al 0.1% de ácido fórmico como fases móviles, se separaron los compuestos en una columna cromatográfica Agilent RRHD SB-C18 (2.1 mm×50 mm, 1.8 μm), con ionización por electrospray en modo ión positivo (ESI+) y detección en modo de monitoreo de reacciones múltiples (MRM). El método cumple con los requisitos de validación metodológica, los 12 nucleósidos normales y modificados muestran una buena relación lineal dentro de un rango de concentración definido, los coeficientes de correlación (r) son mayores a 0.99, el límite de cuantificación (LOQ) es de 0.17 a 3.13 ng/mL y el límite de detección (LOD) de 0.08 a 1.56 ng/mL. El método se aplicó a líneas celulares de carcinoma nasofaríngeo humano 5-8F, carcinoma cervical Hela y células epiteliales renales humanas 293T, detectando con éxito varios niveles de nucleósidos modificados. El método requiere una cantidad baja de células (2×10^6 por muestra), un tiempo de análisis corto (6 minutos por muestra) y alta sensibilidad, proporcionando un método analítico eficaz para la investigación del cáncer y el diagnóstico clínico.

nucleósido; nucleósido modificado; ARNm; células tumorales; cromatografía líquida ultrarrápida-espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS)