Se estableció un método analítico para la determinación de progesterona en suero humano mediante cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS). Las muestras de suero se sometieron a extracción líquido-líquido (LLE) con acetato de etilo y n-hexano, utilizando una columna cromatográfica Acquity UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7 μm) para separación en gradiente, con un tiempo de corrida cromatográfica de 5 minutos, y se empleó ionización por electrospray (ESI) en modo iónico positivo junto con monitoreo de reacciones múltiples (MRM), cuantificación por método de estándar isotópico interno. Se evaluó el efecto de una extracción en dos pasos sobre la recuperación de progesterona, la separación usando diferentes fases móviles y la estabilidad de las muestras; los resultados mostraron que la separación fue mejor usando metanol con solución de amoníaco al 0.1% como fase móvil. Bajo condiciones optimizadas, la progesterona presentó buena linealidad en el rango de 10 a 10 000 pg/mL (r2=0.9998), con límites de detección y cuantificación de 5 y 10 pg/mL respectivamente; la recuperación media fue de 91.5% a 106%, con desviación estándar relativa (RSD) intra-día del 1.2% al 8.2%, y RSD inter-día del 4.1% al 9.1%. Se aplicó el método a 30 muestras de suero reales, con concentraciones de progesterona entre 0.0502 y 1.3635 ng/mL, todas dentro del rango fisiológico normal. El método es sensible, preciso y confiable, adecuado para la detección de niveles fisiológicos de progesterona en muestras clínicas de suero.

progesterona; dilución isotópica; cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS); extracción líquido-líquido (LLE); suero