Determinación del contenido de colágeno tipo I bovino por cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a espectrometría de masas

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摘要

Se estableció un método basado en cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a espectrometría de masas mediante péptidos característicos para detectar el contenido de colágeno tipo I bovino. Las muestras de esponja de colágeno fueron tratadas con digestión enzimática y luego separadas por cromatografía. La determinación se realizó bajo un modo de monitoreo de ion único (SIM) dependiente del tiempo de retención en una fuente de ionización por electrospray en modo positivo y cuantificación mediante método externo. El péptido característico obtenido por digestión específica con tripsina para el colágeno tipo I bovino fue GFSGLDGAK. Este péptido mostró buena linealidad en el rango de concentración de masa de 0.645 a 21.5 μg/mL (r2=0.9994); el límite de cuantificación del método fue de 6.45×10⁻⁴ μg/mL; en tres niveles de espiking de 3.10, 2.48 y 1.55 μg/mL, la tasa media de recuperación fue de 98.2 % a 102 %; la desviación estándar relativa del área del pico (n=6) fue del 0.80 %. Las muestras de esponja de colágeno pasaron pruebas de uniformidad, estabilidad y cuantificación, asegurando la efectividad del método y verificando la calidad del producto, con un contenido de colágeno tipo I bovino medido en (0.926±0.014) mg/mg. El método es sencillo, rápido, con buena reproducibilidad y alta estabilidad, permitiendo cuantificar eficazmente el colágeno tipo I bovino.

关键词

cromatografía líquida de alta eficacia-espectrometría de masas (HPLC-MS); péptido característico; colágeno tipo I bovino; cuantificación

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