Se sintetizaron in vitro cuatro estereoisómeros del aducto de ADN de benzo[a]pireno — anti-BPDE-N2-dG (aducto de epóxido de diol de benzo[a]pireno unido a desoxiguanosina). Mediante la optimización de las condiciones de reacción in vitro, el rendimiento de síntesis de los cuatro estereoisómeros anti-BPDE-N2-dG aumentó más del doble en comparación con los métodos existentes, proporcionando estándares para la detección cuantitativa en organismos. Por primera vez, se aplicó una columna pentafluorofenilo para la separación cromatográfica de estos estereoisómeros. Mediante la optimización de las condiciones cromatográficas, usando una columna pentafluorofenilo convencional (250 mm × 4,6 mm, 5 μm), con fase móvil de acetonitrilo-agua con 0,1 % de ácido fórmico (22,5∶77,5) a un flujo de 1,2 mL/min, la separación y purificación de los cuatro estereoisómeros se logró en 45 minutos. Este método acorta el tiempo en comparación con una columna C18 convencional (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) que requiere 160 minutos, y una columna fenilo (250 mm × 4,6 mm, 5 μm) que requiere entre 85 y 100 minutos, aumentando la eficiencia de la purificación. Los estereoisómeros fueron caracterizados mediante espectroscopía de absorción ultravioleta, espectrometría de masas y dicroísmo circular, determinándose el orden de elución como trans(-), trans(+), cis(+), cis(-)-anti-BPDE-N2-dG. Además, al detectar con cromatografía líquida de alto rendimiento-espectrometría de masas en tándem (HPLC-MS/MS) los estándares de los cuatro estereoisómeros anti-BPDE-N2-dG, el uso de una columna pentafluorofenilo convencional permitió completar la separación y detección en 30 minutos, mejorando la eficiencia en comparación con una columna fenilo con las mismas especificaciones que requiere 60 minutos.

aducto de ADN benzo[a]pireno; aducto epóxido de diol benzo[a]pireno-desoxiguanosina; columna pentafluorofenilo; cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC); espectrometría de masas en tándem