Para enfrentar el desafío técnico de la alta demanda de cantidad inicial de muestra en el análisis de glicómica, este estudio desarrolló una técnica de preparación de glicanos N en muestras pequeñas (GPAT). Mediante la carga separada de rellenos C18 y HILIC en la punta de la micropipeta (Tip), se realiza una digestión proteica in situ, liberación y enriquecimiento de los glicanos N en un solo paso. En comparación con la estrategia de análisis de glicoma basada en la preparación de muestras asistida por filtración (FASP) ampliamente utilizada, la técnica GPAT permite la liberación y enriquecimiento in situ de glicanos N a partir de pequeñas cantidades de inmunoglobulina G (IgG) y proteínas extraídas de células de carcinoma hepatocelular humano HepG2, reduciendo la cantidad inicial de muestra en un 90%. Se detectaron 20 y 39 glicanos N respectivamente a partir de 10 μg de IgG y 10 μg de proteínas de células HepG2. De 10 μg de proteínas de orina extraídas de la orina de 6 individuos sanos (3 hombres, 3 mujeres) se detectaron 49 glicanos N. Este método ofrece una estrategia de análisis cuantitativo simple y rápida de glicanos N en muestras complejas de pequeño volumen, sentando las bases para la promoción futura de los métodos de glicómica.

Glicanos N;Glicómica;Proteínas urinarias;Espectrometría de masas en tándem con desorción/ionización por láser asistida por matriz y tiempo de vuelo