Se realizó una caracterización estructural completa del estándar de anticuerpo monoclonal tipo IgG1. La masa molecular exacta del anticuerpo antes y después de la eliminación de N-glicanos se midió mediante espectrometría de masas Exactive plus EMR, y se calculó la masa molecular completa en un rango de 148 285.0 a 149 020.8, la masa completa después de la eliminación de glicanos fue de 145 810.4, y el contenido de N-glicanos fue de 1.67% a 2.15%. Se optimizó el método de electroforesis capilar con enfoque isoeléctrico en tiempo real (WCID-cIEF), y los resultados mostraron que el punto isoeléctrico del anticuerpo estaba entre 8.21 y 8.74, con un componente principal en 8.61 y un contenido relativo del 61.43%. Luego se utilizó cromatografía de intercambio iónico para detectar la heterogeneidad de carga, encontrando que el pico básico era del 4.1%, el pico ácido del 23.9% y el pico principal del 72.0%, coincidiendo con los resultados del WCID-cIEF, lo que demostró una buena reproducibilidad entre los métodos. El análisis de los mapas peptídicos antes y después de la eliminación de glicanos proporcionó información sobre la distribución de glicopéptidos, identificó sitios de modificación glucídica y las regiones determinantes complementarias (CDR) de las cadenas pesadas y ligeras, los sitios y tasas de oxidación de la metionina (M), y a través del análisis de mapas peptídicos antes y después de la reducción del anticuerpo se elucidaron los enlaces disulfuro. Los resultados también sugieren que este estándar de anticuerpo no presenta modificaciones glucídicas en el extremo C.

estándar de anticuerpo;masa molecular;punto isoeléctrico;heterogeneidad de carga;mapa peptídico