La separación de fase líquido-líquido (LLPS), como mecanismo fundamental para la formación de condensados biomoleculares, sus características físicas microscópicas y la caracterización cuantitativa de las propiedades materiales son clave para entender la función y regulación de los condensados. Este artículo revisa sistemáticamente diversas técnicas utilizadas para analizar la morfología microscópica y las características físicas de LLPS. En cuanto a la caracterización de tamaño y estructura, la dispersión dinámica de luz y la dispersión de pequeños ángulos permiten monitorear in situ la nucleación, crecimiento y orden interno de los condensados; la microscopía electrónica criogénica y la microscopía de fuerza atómica proporcionan información ultraestructural y nanomecánica con resolución casi atómica. En cuanto a la caracterización dinámica y reológica, las plataformas microfluídicas, la espectroscopía de correlación de fluorescencia, el seguimiento de moléculas individuales, la recuperación tras fotoblanqueo y las técnicas de pinzas ópticas revelan a múltiples escalas la viscosidad, tensión interfacial y tasa de intercambio molecular de los condensados, desde la fusión macroscópica hasta la difusión molecular individual. En cuanto a la conformación molecular y las interacciones, métodos espectroscópicos como RMN, infrarrojo por transformada de Fourier, dicroísmo circular y espectroscopía Raman permiten resolver a nivel residual los cambios en la estructura secundaria de proteínas en estado condensado y la naturaleza química de las interacciones moleculares débiles. Además, los métodos de proteómica basados en espectrometría de masas pueden analizar sistemáticamente la composición molecular y las redes de interacción de los condensados, mientras que la anisotropía de fluorescencia puede detectar la orientación molecular de fibras dentro de los condensados. Finalmente, las propiedades electroquímicas de los condensados, como la técnica de separación electroforética en milisegundos y los métodos de medición del potencial zeta, proporcionan referencias para las interacciones biomoleculares y funciones fisiológicas. La aplicación integrada y la validación cruzada de estas técnicas proporcionan un apoyo sólido para construir una imagen fisicoquímica completa de LLPS desde la escala molecular hasta la mesosómica.

separación de fase líquido-líquido;condensados biomoleculares;orgánulos sin membrana;métodos analíticos;fluorescencia de molécula única;potencial zeta;simulación gruesa