Los laboratorios convencionales a menudo enfrentan dificultades en la preparación de muestras microbiológicas para microscopía electrónica de barrido (SEM) debido a la falta de reactivos fijadores y equipos de secado por punto crítico. Para resolver estas dificultades, se eligió el permanganato de potasio (KMnO₄) como fijador celular, y se mejoraron y analizaron los métodos de preparación relacionados con los pasos clave de fijación y secado en la preparación de muestras para SEM, con el objetivo de establecer un método universal seguro, económico y con baja dependencia del equipo para la preparación de muestras microbiológicas para SEM. Se estudiaron Escherichia coli, Bacillus subtilis y Saccharomyces cerevisiae. Las células fueron fijadas con glutaraldehído (fijación simple GA), fijación doble con glutaraldehído y tetraóxido de osmio (fijación GA-OT) y fijación doble con glutaraldehído y permanganato de potasio (fijación GA-PP). Se combinaron diferentes métodos de secado: liofilización, secado natural, secado a baja temperatura, secado a temperatura media-baja y secado por punto crítico. Después del secado, se realizaron imágenes SEM para comparar el efecto de estos tratamientos en la morfología y la integridad celular. Los resultados mostraron que la fijación GA-OT y GA-PP fijaron la morfología celular significativamente mejor que la fijación GA; la liofilización y el secado por punto crítico preservaron mejor la morfología nativa. El protocolo GA-PP con liofilización preservó eficazmente la estructura morfológica de tres tipos de microorganismos (Gram-negativos, Gram-positivos y hongos unicelulares eucariotas), satisfaciendo los requisitos de imagen SEM, con ventajas de economía, universalidad, seguridad y alto valor para la promoción. Este método ofrece una solución alternativa viable para laboratorios convencionales para la preparación de muestras microbiológicas para SEM.

microorganismos; preparación SEM; doble fijación glutaraldehído-KMnO₄; secado