Estudio del sensor de amplificación en cascada por ensamblaje catalítico de horquilla/ DNAzyme activado por luz ultravioleta y detección de miR-21

LI Xing-yue ,  

WANG Guo-rui ,  

WANG Xue ,  

SHU Yang ,  

摘要

MicroRNA-21 (miR-21), uno de los primeros miRNA descubiertos en el genoma humano, proporciona información importante para el diagnóstico temprano del cáncer, el tratamiento farmacológico y la evaluación pronóstica. Para abordar problemas de baja abundancia de miRNA y complejas interferencias de fondo, este estudio utilizó la rotura de cadenas de ADN activada por luz ultravioleta, combinada con el ensamblaje catalítico de horquillas (CHA) y la técnica de amplificación por DNAzyme, para construir un sensor de amplificación en cascada controlado por luz (CHA-DNAzyme). La cadena iniciadora de CHA inicialmente estaba bloqueada por una horquilla que contenía un enlace fotolítico, y la cadena iniciadora se liberaba y la reacción CHA se activaba solo bajo la acción conjunta de la luz ultravioleta y el miR-21 objetivo. Al mismo tiempo, fragmentos inactivos de DNAzyme fueron integrados en los reactivos metastables de horquillas CHA, formando DNAzyme durante el proceso de CHA. El DNAzyme activo corta cíclicamente la cadena sustrato S para lograr la amplificación de la señal. En las mejores condiciones, esta plataforma mostró una buena relación lineal en el rango de 0.3 a 10 nmol/L, con un límite de detección de 189 pmol/L. Además, la plataforma presenta alta especificidad para diferentes secuencias de desajuste de bases, y se utilizó con éxito para la detección de miR-21 en muestras de suero diluidas, mostrando un buen potencial para el análisis altamente sensible de miRNA.

关键词

Ensamblaje catalítico de horquilla; DNAzyme; Amplificación de señal; Activación por luz ultravioleta; miR-21

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