Determinación por cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem de cinco metabolitos endógenos en suero de rata con inmunosupresión inducida por ciclofosfamida
Se estableció un método para la determinación de cinco metabolitos endógenos en suero de ratas con inmunosupresión inducida por ciclofosfamida utilizando cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS): glutatión (GSH), DL-glutamina (DL-Gln), ácido glutámico (GA), 1-O-hexadecil-sn-glicerofosfocolina (LPC (0-16∶0)) y ácido araquidónico (AA). Tras la precipitación de proteínas en las muestras de suero, se utilizó una columna cromatográfica ACQUITY Poroshell 120 SB-C18 (2.1 mm × 100 mm, 2.7 µm) con fase móvil de metanol y acetato de amonio 5 mmol·L-1 en gradiente para determinar GSH, DL-Gln, GA y AA; y una columna ACQUITY UPLC BEH Amide (2.1 mm × 150 mm, 1.7 µm) con fase móvil de acetonitrilo y formiato de amonio 5 mmol·L-1 en gradiente para determinar LPC(0-16∶0). La espectrometría de masas se realizó con fuente de ionización por electrospray (ESI) en modo iónico positivo y negativo, cuantificación por método de estándar interno. Los resultados mostraron una buena linealidad para los cinco metabolitos en sus rangos de concentración respectivos (r >0.995), límites de detección entre 0.043 y 0.178 ng·mL-1, límites de cuantificación entre 0.145 y 0.592 ng·mL-1. Este método es simple, rápido y altamente sensible, adecuado para la determinación de metabolitos endógenos en suero de rata y proporciona una base experimental para el estudio del mecanismo de acción de fármacos para el tratamiento de la inmunosupresión.
关键词
cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem; suero; metabolitos endógenos; supresión inmune