Determinación por cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem de cinco metabolitos endógenos en suero de rata con inmunosupresión inducida por ciclofosfamida

XU Ai-li ,  

WU Min-shan ,  

CHEN Wei-tao ,  

ZENG Zhi-hao ,  

XIAO Guan-lin ,  

LU Wen-sen ,  

LI Yang-xue ,  

摘要

Se estableció un método para la determinación de cinco metabolitos endógenos en suero de ratas con inmunosupresión inducida por ciclofosfamida utilizando cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS): glutatión (GSH), DL-glutamina (DL-Gln), ácido glutámico (GA), 1-O-hexadecil-sn-glicerofosfocolina (LPC (0-16∶0)) y ácido araquidónico (AA). Tras la precipitación de proteínas en las muestras de suero, se utilizó una columna cromatográfica ACQUITY Poroshell 120 SB-C18 (2.1 mm × 100 mm, 2.7 µm) con fase móvil de metanol y acetato de amonio 5 mmol·L-1 en gradiente para determinar GSH, DL-Gln, GA y AA; y una columna ACQUITY UPLC BEH Amide (2.1 mm × 150 mm, 1.7 µm) con fase móvil de acetonitrilo y formiato de amonio 5 mmol·L-1 en gradiente para determinar LPC(0-16∶0). La espectrometría de masas se realizó con fuente de ionización por electrospray (ESI) en modo iónico positivo y negativo, cuantificación por método de estándar interno. Los resultados mostraron una buena linealidad para los cinco metabolitos en sus rangos de concentración respectivos (r >0.995), límites de detección entre 0.043 y 0.178 ng·mL-1, límites de cuantificación entre 0.145 y 0.592 ng·mL-1. Este método es simple, rápido y altamente sensible, adecuado para la determinación de metabolitos endógenos en suero de rata y proporciona una base experimental para el estudio del mecanismo de acción de fármacos para el tratamiento de la inmunosupresión.

关键词

cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas en tándem; suero; metabolitos endógenos; supresión inmune

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