La diversidad topológica de los cuádruplex G (G4) está estrechamente relacionada con sus funciones biológicas, y establecer métodos de detección de alta sensibilidad es fundamental para analizar la relación estructura-función. Este estudio evaluó sistemáticamente el rendimiento de detección de G4 mediante tres nanoporo: la porina MspA de Mycobacterium smegmatis, la aerolisina (AeL) y la alfa-hemolisina (HL), y construyó con éxito un sistema de detección de nanoporo sin etiquetado basado en HL a nivel de una sola molécula. Este sistema permite distinguir eficazmente el ADN de cadena sencilla (ssAf17) de las diferentes topologías de G4, como la estructura paralela c-Myc, la estructura antiparalela TBA y la estructura mixta H24A. Para resolver el problema del tiempo de bloqueo demasiado largo del c-Myc27bp, se diseñó la estructura c-Myc77bp añadiendo 25 adeninas (A) en cada extremo de la secuencia, que muestra una señal característica de "doble escalón" durante el paso por el poro, mejorando significativamente la identificación de la señal y la eficiencia de paso. Este estudio proporciona una nueva estrategia para el análisis de topologías G4 a nivel de molécula única, ampliando la aplicación de la tecnología de nanoporo en el análisis de estructuras nucleicas superiores y brindando soporte técnico para el desarrollo de fármacos dirigidos a enfermedades relacionadas.

tecnología de nanoporo; cuádruplex G; detección a nivel molecular único; distinción topológica; alfa-hemolisina