La proteína quinasa A (PKA) desempeña un papel importante en diversos procesos biológicos, regulando las señales celulares, la proliferación, la diferenciación y la apoptosis. Por lo tanto, la monitorización e inhibición de la actividad de la PKA es significativa en el diagnóstico médico y el descubrimiento de fármacos. Este artículo construye una plataforma de sensores electroquímicos basada en el código de barras de ADN (DNA barcode) y la estrategia de amplificación de señal mediante amplificación en círculo rodante (RCA) para el análisis de la actividad de PKA y la selección de sus inhibidores. Se utiliza un material compuesto de jaula de nanopartículas de oro/disulfuro de molibdeno (AuNCs/MoS₂) para modificar el electrodo, las cadenas de péptidos sustrato se autoensamblan mediante enlace oro-azufre en la superficie del electrodo modificado (AuNCs/MoS₂/GCE), y bajo la inducción de PKA ocurre fosforilación terminal, seguida de una unión altamente específica con partículas de oro marcadas con código de barras de ADN (DNA barcode-AuNPs). Bajo la acción de la ligasa de ADN T4, las cadenas de ADN de las partículas de oro con código de barras se hibridan con una plantilla de ADN circular formando una sonda de cierre. Tras añadir la ADN polimerasa phi29 y dNTP, se induce la reacción RCA. El producto RCA forma con hemina (Hemin) una enzima simulada con actividad catalítica de cuádruplex G-hemina para amplificar la señal electroquímica y analizar la actividad de PKA. El rango de respuesta lineal del sensor electroquímico para la actividad de PKA es de 0,005 a 100 U/mL, y el límite de detección (LOD) es de 1 mU/mL. Este método puede utilizarse para el cribado de inhibidores de PKA y el análisis de la actividad de PKA en lisados de células de cáncer de mama humano (MCF-7) y de células de cáncer de hígado (HepG-2), proporcionando un nuevo método para el análisis de la actividad de quinasas.

código de barras de ADN;amplificación RCA;proteína quinasa;fosforilación;sensor electroquímico