Se estableció un método de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) para la detección rápida de escopolamina racémica, atropina y escopolamina en contenido gástrico, plasma y orina de pacientes intoxicados con mandrágora. Se extrajeron el contenido gástrico, el plasma y la orina con metanol, y se separaron mediante elución en gradiente en una columna C18. La fase móvil fue una solución acuosa de ácido fórmico al 0.1%-metanol. Se utilizó ionización por electrospray en modo positivo con detección por monitorización de reacciones múltiples (MRM). La cuantificación se realizó mediante curva externa ajustada a la matriz. Los tres alcaloides mostraron una buena linealidad en el rango de 0.1 a 10 ng/mL, con un coeficiente de correlación (r) superior a 0.999; los límites de detección (LOD) en contenido gástrico, plasma y orina fueron de 0.02 a 0.05 μg/kg, 0.01 a 0.03 ng/mL y 0.04 a 0.05 ng/mL, respectivamente, y los límites de cuantificación (LOQ) fueron de 0.07 a 0.09 μg/kg, 0.03 a 0.10 ng/mL y 0.08 a 0.10 ng/mL. El rendimiento promedio en tres concentraciones añadidas en muestras biológicas fue de 82.6 % a 115 %, con desviación estándar relativa (RSD, n=6) de 0.70 % a 8.5 %, RSD intralote de 2.2 % a 8.5 % y RSD entre lotes de 0.70 % a 7.9 %. El método es cualitativamente preciso, con límites de detección adecuados para dosis tóxicas en pacientes, y es adecuado para el análisis de la fuente de intoxicación.