Se construyó un método para la detección amplificada en colaboración basado en la reacción de amplificación isotérmica de desplazamiento de cadena de ácido nucleico (ISDA) y el sistema CRISPR-Cas12a para detectar microRNA-31 (miRNA-31), utilizando una tira de prueba de realce fluorescente inverso (rLFTS) como plataforma de señal para lograr detección visual. Mediante la optimización del diseño de cebadores de la reacción ISDA y del tampón de reacción, se logró el reconocimiento específico de miRNA-31 y la primera amplificación de señal, generando un producto de ADN de doble cadena que activa la actividad de corte trans transcrítica de CRISPR-Cas12a sobre moléculas reporteras de ADN de cadena simple (ssDNA) libres, mientras que inhibe la formación de una estructura tipo sándwich entre las sondas de oro nano y la sonda fluorescente Cy5 en la línea de detección, restaurando así la fluorescencia Cy5, utilizándose esto como señal cuantitativa para una detección altamente sensible y específica de miRNA-31. El límite de detección en muestras de saliva es tan bajo como 57.9 amol/L, con una tasa de recuperación del 91.6 % al 111 %, y los resultados de la detección muestran buena concordancia con los resultados cuantitativos de la reacción en cadena de la transcriptasa inversa cuantitativa (qRT-PCR), con un tiempo de detección de solo 90 minutos. Los resultados experimentales demuestran que el método tiene ventajas de operación simple, alta sensibilidad y tiempo de detección corto, satisfaciendo la necesidad de detección ultrasensible de miRNA-31 en muestras de saliva.

Amplificación isotérmica por desplazamiento de cadena;CRISPR-Cas12a;Tira de prueba de realce fluorescente inverso;MiRNA-31;Detección de ácidos nucleicos