En la amplificación isotérmica tradicional por índice, la energía en los extremos del ácido nucleico objetivo y la plantilla simétrica de amplificación es la misma; sin embargo, cuando el ácido nucleico objetivo se hibrida con el extremo 5’ de la plantilla, la amplificación es difícil de iniciar, lo que limita el análisis de cantidades traza del nucleico objetivo. En este trabajo se desarrolla una estrategia de amplificación isotérmica por índice inducida por hibridación asimétrica (AEXPRA) para el análisis rápido y de alta sensibilidad de microARN. Tomando como objetivo el miR-196b, basado en una plantilla de amplificación asimétrica diseñada, debido a que el objetivo es completamente complementario al extremo 3’ de la plantilla pero parcialmente complementario al extremo 5’, miR-196b puede hibridarse completamente al extremo 3’ de la plantilla. El método presenta alta sensibilidad, alta especificidad y rapidez. El tiempo total de reacción es inferior a 30 minutos, y puede detectar miR-196b a niveles tan bajos como 0,42 amol/L. Para verificar la utilidad del método, se aplicó al análisis de miR-196b en extractos de suero, distinguiendo eficazmente la expresión de miR-196b en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas y personas sanas, con resultados consistentes con RT-qPCR. El método tiene alta precisión y fiabilidad, y se espera que desempeñe un papel importante en el diagnóstico clínico y la investigación patológica del miARN.

amplificación isotérmica por índice;microARN;detección por fluorescencia;diagnóstico de enfermedades