Hidrólisis alcalina-enzimática combinada con extracción en fase sólida dispersiva para mejorar la precisión en la determinación de la cantidad total activa de isoflavonas de soja

GU Wen ,  

LI Chen-man ,  

SUN Zhen ,  

PANG Yue-hong ,  

FENG Yong-wei ,  

SHEN Xiao-fang ,  

摘要

Mediante extracción ultrasónica con solución de metanol alcalino, combinada con hidrólisis por β-glucosidasa derivada de almendras y extracción en fase sólida dispersiva con poliamida, se estableció un método para determinar la cantidad total activa de isoflavonas de soja mediante cromatografía líquida ultraeficiente. Los glucósidos malonil y acetil de isoflavonas presentes en la muestra se hidrolizan a glucósidos básicos en condiciones alcalinas y, bajo la acción de β-glucosidasa, se desglucósilan para transformarse en los aglicones correspondientes. En la muestra, 12 formas diferentes de isoflavonas se transforman en solo 3 aglicones (daidzeína, genisteína, glicetina), seguidos de extracción dispersiva en fase sólida con polvo de poliamida y separación en columna cromatográfica inversa C18 (2.1 mm i.d. × 50 mm, 1.8 µm). Los resultados muestran que la daidzeína, genisteína y glicetina se separan en línea base en 3 minutos; los coeficientes de correlación de las curvas estándar (r2) de los 3 aglicones son mayores a 0.999; la recuperación total de isoflavonas es del 94.3% al 102%, y la desviación estándar relativa (RSD, n=6) es menor al 5.0%, indicando alta precisión y exactitud. El método determina el total de isoflavonas detectando todos los aglicones de la muestra, lo que ayuda a reducir los desafíos de resolución, precisión y costo de detección. Considerando los mecanismos de transformación y absorción fisiológica de isoflavonas en el cuerpo, la cantidad total de aglicones refleja científicamente el nivel real de actividad de isoflavonas y evita la sobreestimación causada por la suma simple de glucósidos y aglicones.

关键词

Isoflavonas de soja;Poliamida (PA);Extracción en fase sólida dispersiva (d-SPE);β-glucosidasa;Cromatografía líquida ultraeficiente (UPLC)

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