Hidrólisis alcalina-enzimática combinada con extracción en fase sólida dispersiva para mejorar la precisión en la determinación de la cantidad total activa de isoflavonas de soja
Mediante extracción ultrasónica con solución de metanol alcalino, combinada con hidrólisis por β-glucosidasa derivada de almendras y extracción en fase sólida dispersiva con poliamida, se estableció un método para determinar la cantidad total activa de isoflavonas de soja mediante cromatografía líquida ultraeficiente. Los glucósidos malonil y acetil de isoflavonas presentes en la muestra se hidrolizan a glucósidos básicos en condiciones alcalinas y, bajo la acción de β-glucosidasa, se desglucósilan para transformarse en los aglicones correspondientes. En la muestra, 12 formas diferentes de isoflavonas se transforman en solo 3 aglicones (daidzeína, genisteína, glicetina), seguidos de extracción dispersiva en fase sólida con polvo de poliamida y separación en columna cromatográfica inversa C18 (2.1 mm i.d. × 50 mm, 1.8 µm). Los resultados muestran que la daidzeína, genisteína y glicetina se separan en línea base en 3 minutos; los coeficientes de correlación de las curvas estándar (r2) de los 3 aglicones son mayores a 0.999; la recuperación total de isoflavonas es del 94.3% al 102%, y la desviación estándar relativa (RSD, n=6) es menor al 5.0%, indicando alta precisión y exactitud. El método determina el total de isoflavonas detectando todos los aglicones de la muestra, lo que ayuda a reducir los desafíos de resolución, precisión y costo de detección. Considerando los mecanismos de transformación y absorción fisiológica de isoflavonas en el cuerpo, la cantidad total de aglicones refleja científicamente el nivel real de actividad de isoflavonas y evita la sobreestimación causada por la suma simple de glucósidos y aglicones.
关键词
Isoflavonas de soja;Poliamida (PA);Extracción en fase sólida dispersiva (d-SPE);β-glucosidasa;Cromatografía líquida ultraeficiente (UPLC)