La generación de segundo armónico (SHG) se utiliza en múltiples disciplinas debido a ventajas como la falta de marcas, baja fototoxicidad y sensibilidad a la estructura del material. Este estudio utiliza piel de ratón in vivo como modelo para explorar las condiciones de imagen SHG en un microscopio de dos fotones. Se usó glicerina como agente de aclaramiento, y se estadística la intensidad de la señal SHG y la profundidad de imagen de la piel tratada con glicerina y agua. Hubo diferencias significativas en la intensidad de la señal y profundidad de imagen entre el grupo tratado con glicerina y el grupo tratado con agua (*p ≤ 0.05), demostrando que la glicerina es un agente de aclaramiento eficiente para experimentos de piel in vivo. Considerando la potencia del láser, las propiedades de fluorescencia espontánea del tejido biológico y la profundidad de imagen, se determinó que la longitud de onda de excitación óptima para la imagen SHG en microscopía de dos fotones es 900 nm. El uso de aclaramiento con glicerina y longitud de onda óptima permitió la recolección de señal SHG de piel tumoral, logrando la observación in vivo del efecto del tumor sobre la estructura de las fibras de colágeno en la piel. Los resultados muestran que el microscopio de dos fotones puede realizar eficazmente imágenes SHG, permitiendo la observación in vivo y el estudio visual de la estructura de las fibras de colágeno en organismos vivos.

Microscopio de dos fotones;Generación de segundo armónico;Tumor;Colágeno