Разработан аналитический метод определения прогестерона в сыворотке крови человека с использованием сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (UPLC-MS/MS). Сывороточные образцы подвергали жидкостно-жидкостной экстракции (LLE) этилацетатом и н-гексаном, затем использовали градиентное разделение на колонке Acquity UPLC BEH C18 (2,1 мм×100 мм, 1,7 мкм) с временем хроматографического анализа 5 минут, ионизацией методом электроспрея (ESI) в положительном ионном режиме и методом множественного реакционного мониторинга (MRM) с количественным определением по изотопному внутреннему стандарту. Изучалось влияние двухэтапного метода экстракции на извлечение прогестерона, эффективность разделения при различных подвижных фазах и стабильность образцов; результаты показали, что использование метанола с 0,1% аммиака в качестве подвижной фазы обеспечивает лучшее разделение. При оптимальных условиях линейность прогестерона выражена хорошо в диапазоне 10~10 000 пг/мл (r2=0,9998), пределы обнаружения и количественного определения составляют 5 и 10 пг/мл соответственно; средняя степень восстановления – 91,5%~106%, внутрисуточное относительное стандартное отклонение (RSD) – 1,2%~8,2%, междневное RSD – 4,1%~9,1%. Метод применен для анализа 30 реальных сывороточных образцов, концентрация прогестерона составила от 0,0502 до 1,3635 нг/мл, что находится в пределах нормального физиологического диапазона. Метод обладает высокой чувствительностью, точностью и надежностью, подходит для определения физиологического уровня прогестерона в клинических сывороточных образцах.

прогестерон; изотопное разбавление; сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией (UPLC-MS/MS); жидкостно-жидкостная экстракция (LLE); сыворотка крови