На основе офлайн двумерной хроматографии и анализа экзогликозидаз была разработана эффективная и надежная методика идентификации структуры N-олигосахаридов гликопротеинов. Сначала с помощью слабой анионной ионозамещающей хроматографии была выполнена подготовка олигосахаридов с разной степенью сиалилирования, затем для идентификации структуры олигосахаридов сочетали лазерно-индуцированное капиллярное электрофорезное разделение с флуоресценцией (CE-LIF) и экзогликозидазный анализ. После флуоресцентного мечения разделенных олигосахаридов проводили верхне-нижнее расщепление (top-down digestion) и нижне-верхнюю идентификацию структуры (bottom-up identification), всего выявлено 18 типов олигосахаридов в IgG. Данная стратегия была применена для анализа N-олигосахаридов в человеческой сыворотке, где относительные количества олигосахаридов с разной степенью сиалилирования составили S1∶S2∶S3∶S4=4.7∶20.9∶6∶1. Результаты показали, что высокообильные нейтральные олигосахариды в сыворотке человека очень похожи по структуре на нейтральные олигосахариды в IgG, при этом наиболее распространенным N-олигосахаридом в сыворотке является двухсиалилированный двухветвевой тип FA2G2S2. Метод демонстрирует определенный потенциал для структурной характеристики N-олигосахаридов гликопротеинов.

офлайн двумерная хроматография; капиллярный электрофорез; иммуноглобулин G; N-олигосахариды; сыворотка человека