Разработан метод анализа 12 нормальных и модифицированных нуклеозидов в мРНК опухолевых клеток. После экстракции общего РНК из образцов опухолевых клеток, очистки мРНК и гидролиза мРНК добавляли 8-бромгуанозин (8Br-G) как внутренний стандарт. Использовали 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде и 0,1% раствор муравьиной кислоты в метаноле в качестве подвижных фаз, разделение осуществляли на колонке Agilent RRHD SB-C18 (2,1 мм×50 мм, 1,8 мкм), детекция методом электроспрей-ионной ионизации в положительном режиме (ESI+) с многореакционным мониторингом (MRM). Метод соответствует требованиям верификации, 12 нормальных и модифицированных нуклеозидов демонстрируют хорошую линейную зависимость в определённом диапазоне концентраций, коэффициенты корреляции (r) превышают 0,99, предел количественного определения (LOQ) составляет от 0,17 до 3,13 нг/мл, предел обнаружения (LOD) — от 0,08 до 1,56 нг/мл. Метод применён к линиям клеток назофарингеальной карциномы 5-8F, клеточной линии рака шейки матки Hela и эпителиальных клеток почки человека 293T, успешно определены уровни различных модифицированных нуклеозидов. Метод требует небольшой объём клеток (2×10^6 на образец), короткое время анализа (6 мин на образец), высокую чувствительность и может служить эффективным аналитическим способом для исследований рака и клинической диагностики.

нуклеозид; модифицированный нуклеозид; мРНК; опухолевые клетки; ультраэффективная жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия (UPLC-MS/MS)