В ответ на техническую проблему высокой начальной потребности в образцах для анализа гликома, в этом исследовании разработана технология подготовки микроколичества N-гликана (GPAT), которая с использованием наполнителей C18 и HILIC в наконечнике пипетки (Tip) обеспечивает одноступенчатое локальное переваривание белка, высвобождение и обогащение N-гликанов. По сравнению с широко используемой технологией подготовки образцов на основе фильтрации (FASP) данная технология GPAT позволяет осуществлять локальное высвобождение и обогащение N-гликанов из малых количеств иммуноглобулина G (IgG) и белков клеток человеческой гепатоцеллюлярной карциномы HepG2, сокращая начальное количество образца на 90%, что позволяет обнаруживать 20 и 39 видов N-гликанов соответственно из 10 мкг IgG и 10 мкг белков клеток HepG2. Из 10 мкг белков мочи, выделенных из мочи 6 здоровых людей (3 мужчин, 3 женщин), было обнаружено 49 видов N-гликанов. Метод обеспечивает простой и быстрый количественный анализ N-гликанов из микроколичеств сложных белковых образцов, что закладывает основу для дальнейшего распространения методик гликома.

N-гликаны;гликомика;мочевой белок;матрично-ассистированная лазерная десорбционно-ионизационная летуче-временная тандемная масс-спектрометрия