Было проведено комплексное структурное характеристика эталонного препарата мРНК-антитела типа IgG1. Используя масс-спектрометрию Exactive plus EMR, определена точная молекулярная масса антитела до и после удаления N-гликана, рассчитана полная молекулярная масса в диапазоне 148 285.0~149 020.8, полная масса после удаления гликана составляет 145 810.4, содержание гликана N составляет 1,67%~2,15%. Оптимизирован метод капиллярного электрофореза с изоэлектрическим фокусированием в реальном времени (WCID-cIEF), результаты показали распределение изоэлектрических точек антител от 8.21 до 8.74, где основная изоэлектрическая точка составляет 8.61 с относительной долей 61.43%. Затем был использован ионообменный хроматографический анализ для определения гетерогенности зарядов, обнаружено, что содержание основного пика составляет 72.0%, основной пик, содержание основной кислой формы — 23.9%, основной пик щелочной формы — 4.1%, результаты совпадают с WCID-cIEF и подтверждают хорошую воспроизводимость методов. Анализ пептидных карт до и после удаления сахаров позволил получить данные о распределении гликопептидов, идентифицировать сайты гликозилирования, определяющие комплементарные детерминанты тяжелой и легкой цепей (CDR), места окисления метионина (M) и степень окисления, а также проанализировать дисульфидные связи до и после восстановления антител. Результаты исследования также показывают отсутствие гликозилирования на C-конце эталонного препарата.

эталонный препарат антител;молекулярная масса;изоэлектрическая точка;зарядовая гетерогенность;пептидная карта