Одноклеточное транскриптомное секвенирование (scRNA-seq) обеспечивает беспрецедентное разрешение для изображения клеточной гетерогенности, однако традиционные методы scRNA-seq сталкиваются с высокой потерей клеток, загрязнением двойниками и высокой стоимостью. Для решения этих ограничений в данной работе разработан метод Well-Multi-seq. Сочетая вложенную микрочиповую структуру с размерной фильтрацией и квазистатическим захватом жидкости, а также стратегию маркировки олигонуклеотидами с модификацией холестерином, достигнута высокая эффективность захвата клеток, низкое загрязнение и низкая стоимость многосемплового смешанного сингл-целл транскриптомного секвенирования. Используя вложенный микрочип, преодолевается ограничение распределения Пуассона, достигается до 94% насыщения микросфер, 74% насыщения клеток и 87% захвата клеток, что значительно улучшает использование клеток и микрокамер. Благодаря стабильному внедрению молекулы холестерина в клеточную мембрану, олигонуклеотидные цепи с кодами образцов закрепляются на поверхности клеток, что позволяет проводить смешанное секвенирование нескольких образцов в одной трубке. Эта стратегия не только значительно снижает затраты на реагенты и упрощает экспериментальный процесс, но и позволяет идентифицировать и удалять мультиклеточные загрязнения в библиотеке. В смешанном секвенировании человеческих и мышиных клеточных линий точность маркировки образцов методом составила 92,60% (человек) и 95,28% (мышь), что доказывает превосходную специфичность маркировки. Благодаря множественным преимуществам Well-Multi-seq, метод обладает потенциальной прикладной ценностью для редких типов клеток, таких как циркулирующие опухолевые клетки, образцы микроигольной биопсии, а также для анализа динамических процессов, таких как скрининг лекарств и эмбриональное развитие, и может стать мощным инструментом для фундаментальных исследований и клинической диагностики.

Секвенирование одиночных клеток;Микрофлюидный чип;Множественная маркировка образцов;Метки с модификацией холестеролом