Одноклеточный транскриптомный секвенирование (scRNA-seq) обеспечивает беспрецедентное разрешение для описания клеточной гетерогенности, однако традиционные методы scRNA-seq сталкиваются с проблемами высокой потери клеток, загрязнения двойными клетками (Doublets) и высокой стоимостью. Для преодоления этих ограничений в данной работе разработан метод Well-Multi-seq. Этот метод сочетает вложенные микроканалные чипы с размерным исключением и квази-статическим захватом жидкости с маркировкой олигонуклеотидов с модификацией холестеролом, что обеспечивает высокую эффективность захвата клеток, низкий уровень загрязнения и низкие затраты на мультисэмпловое смешанное одноклеточное транскриптомное секвенирование. Используя вложенные микроканалные чипы, удалось преодолеть ограничения распределения Пуассона, достигнув до 94% заполнения микросфер, 79% занятости клеток и 87% эффективности захвата клеток, что значительно улучшает использование клеток и микрокамер. Благодаря стабильному внедрению молекул холестерола в мембрану клетки олигонуклеотидные цепи с кодами образцов закрепляются на поверхности клеток, что позволяет проводить мультисэмпловое смешанное секвенирование в одной пробирке. Эта стратегия не только значительно снижает стоимость реагентов и упрощает экспериментальный процесс, но и позволяет идентифицировать и удалять загрязнение двойными клетками из библиотеки. При смешанном секвенировании клеточных линий человека и мыши точность маркировки образцов составила 97,1% (человек) и 98,9% (мышь), что подтверждает высокую специфичность маркировки. Благодаря многочисленным преимуществам Well-Multi-seq, данный метод имеет потенциальное приложение для редких типов клеток, таких как циркулирующие опухолевые клетки, микроигольчатые биопсии, а также для анализа динамических процессов, таких как скрининг лекарств и эмбриональное развитие, являясь мощным инструментом для фундаментальных исследований и клинической диагностики.

Одноклеточное секвенирование;Микрофлюидные чипы;Мульти-метки образцов;Метки с модификацией холестеролом