В данной работе на основе сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (UPLC-MS/MS) разработан метод анализа 34 β-лактамных антибиотиков в косметических средствах. Образцы извлекали 20%-ным раствором ацетонитрила, жирорастворимые примеси удаляли экстракцией гексаном, затем после центрифугирования брали нижний слой раствора, разделяли на хроматографической колонке Agilent ZORBAX SB-Aq (2,1 мм×100 мм, 1,8 мкм) с градиентным элюированием подвижной фазой из 0,2% раствора муравьиной кислоты и ацетонитрила. Данные детектировались методом электрораспылительной ионизации (ESI) в режимах положительных и отрицательных ионов с множественным мониторингом реакций (MRM). Количественный анализ проводился с использованием матричной калибровочной кривой. Результаты показали хорошую линейную зависимость для 34 β-лактамных антибиотиков в соответствующем диапазоне масс-концентраций (r>0,995), пределы обнаружения составили 0,03~1,5 мкг∙г-1, пределы количественного определения — 0,1~5 мкг∙г-1. Средний выход при добавлении на трех уровнях (низкий, средний, высокий) для четырех видов косметических матриц (крем, эмульсия, водный раствор, гель) составил 85,9%~111%, относительное стандартное отклонение (RSD, n=6) — 0,90%~8,0%. Метод прост, быстр, чувствителен и точен, применим для определения 34 β-лактамных антибиотиков в косметических средствах, обеспечивая техническую поддержку контроля качества и рыночного надзора.