Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с дифференциальным рефрактометрическим детектором для определения содержания защитных агентов и питательных веществ в стеклованном криоконсерванте
Разработан метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с дифференциальным рефрактометрическим детектором (HPLC-RID) для одновременного определения содержания 4 защитных агентов и 2 питательных веществ в стеклованном криоконсерванте. Для элюирования использовали раствор серной кислоты концентрацией 0,01 моль/л, разделение проводилось на хроматографической колонке BIO-RAD Aminex HPX-87H (300 мм×7,8 мм, 9 мкм), детектирование осуществлялось с помощью дифференциального рефрактометрического детектора (RID), количественное определение — методом внешнего стандарта. Результаты показали, что при оптимизированных условиях хроматографии 6 компонентов хорошо разделяются, а в рассматриваемом диапазоне концентраций наблюдается хорошая линейная зависимость с коэффициентами корреляции (r) не ниже 0,9999. Предел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) составляют соответственно 0,009~0,025 мг/мл и 0,030~0,085 мг/мл. Средний выход добавления при трех уровнях концентрации (низкий, средний, высокий) для отрицательного образца составляет 99,8%~103%, относительное стандартное отклонение (RSD, n=3) — 0,20%~1,8%. Метод является простым, специфичным и точным, подходит для определения содержания защитных агентов и питательных веществ в стеклованном криоконсервативе.
关键词
высокоэффективная жидкостная хроматография с дифференциальным рефрактометрическим детектором; стеклованный криоконсервант; криоконсервация эмбрионов; защитные агенты; питательные вещества