Разработан метод совместного усиления для обнаружения microRNA-31 (miRNA-31) на основе изотермического реактивного замещения цепи нуклеиновой кислоты (ISDA) и системы CRISPR-Cas12a с использованием полоски обратного флуоресцентного усиления (rLFTS) в качестве платформы сигнала для визуализации обнаружения. Оптимизируя дизайн праймеров для реакции ISDA и буферный раствор, обеспечивается специфическое распознавание miRNA-31 и первичное усиление сигнала, что приводит к выходу двуцепочечной ДНК и активации трансо-резательную активность CRISPR-Cas12a на свободной одноцепочечной ДНК (ssDNA) в качестве молекул-репортеров. Это одновременно препятствует образованию сэндвич-структур золотых нанозондов с флуоресцентным зондом Cy5 на линии детекции, восстанавливая флуоресценцию Cy5, что служит количественным сигналом. Порог обнаружения miRNA-31 в образцах слюны составляет 57,9 амоль/л, с добавочным коэффициентом восстановления в диапазоне 91,6%~111%, а результаты сопоставимы с количественными результатами обратной транскрипции с полимеразной цепной реакцией (qRT-PCR). Время обнаружения составляет всего 90 минут. Экспериментальные результаты показывают, что метод прост в эксплуатации, обладает высокой чувствительностью и коротким временем обнаружения, удовлетворяя потребности сверхчувствительного выявления miRNA-31 в образцах слюны.

Изотермическая цепная реакция замещения;CRISPR-Cas12a;Полоска обратного флуоресцентного усиления;MiRNA-31;Обнаружение нуклеиновых кислот