В традиционном изотермическом индексном амплификации энергия концов цельной нуклеиновой кислоты и симметричного амплификационного шаблона одинакова, однако при гибридизации цели с 5’-концем шаблона амплификация затруднена, что ограничивает анализ следовых количеств нуклеиновой кислоты. В этой работе разработана стратегия изотермической индексной амплификации, индуцированной асимметричным гибридизационным механизмом (AEXPRA), для высокочувствительного и быстрого анализа microRNA. В качестве цели выбран miR-196b, основанная на разработанном асимметричном амплификационном шаблоне: поскольку цель полностью комплементарна 3’-концу шаблона, но частично комплементарна 5’-концу, miR-196b может полностью гибридизоваться с 3’-концом шаблона. Метод характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью и скоростью. Время реакции менее 30 минут, чувствительность до 0,42 амоль/л для miR-196b. Для проверки применимости метод использован для анализа miR-196b в сывороточных экстрактах, успешно разделяя экспрессию miR-196b у пациентов с немелкоклеточным раком легких и здоровых людей, результаты совпали с RT-qPCR. Метод обладает высокой точностью и надежностью, обещая важную роль в клинической диагностике и патологическом исследовании miRNA.

изотермическая индексная амплификация;микрорнк;флуоресцентное обнаружение;диагностика заболеваний