Был разработан метод на основе детекции характерных пептидов для определения аллергенных белков в продуктах из креветок с помощью протеолиза трипсином / высокоэффективной жидкостной хроматографии - квадрупольного масс-спектрометра с временем пролета. В качестве реагентов для денатурации белков использовали по 700 мкл 6 моль/л гуанидиния хлорида и 50 ммоль/л буфера тригидроксиметиламинометан - соляной кислоты (Tris-HCl). Оптимизируя время протеолиза и характерные пептиды, было определено использование 50 ммоль/л дикарбонитредуктазы и 100 ммоль/л иодоацетамида для разрушения и ингибирования образования дисульфидных связей, после чего при слабощелочной среде с 100 мкл 500 ммоль/л бикарбоната натрия выполнялся протеолиз 10 мг/мл трипсином. В качестве подвижной фазы применялись ацетонитрил и водный раствор 0,1% муравьиной кислоты. Разделение осуществлялось на хроматографической колонке Caprisil C₁₈-X (100 мм × 2,1 мм, 1,8 мкм). Ионизация проводилась в положительном ионном режиме с двойным источником электроспрея (Dual AJS ESI), сбор данных выполнялся методом итеративного исключения ионов Auto MS/MS на квадрупольно-временном масс-спектрометре. По пиковым данным пептида был выбран IQLLEEDLER как характерный пептид миозина, количественное определение проводилось по внешнему стандарту. Результаты показали хорошую линейную зависимость выбранного пептида в линейном диапазоне с коэффициентом корреляции (r²) 0,9920, предел обнаружения 0,68 мкг/л, предел количественного определения 2,28 мкг/л, восстановление образцов при уровнях добавки 2 и 10 мг/кг составило 84,5%–101%. Метод обладает простой предварительной обработкой, высокой чувствительностью, хорошей воспроизводимостью, точной качественной и количественной оценкой, что может обеспечить техническую поддержку для тестирования и идентификации аллергенов креветок, а также служить методической ссылкой для определения компонентов животного происхождения на основе характерных пептидов белков.

Протеолиз трипсином; ВЖХ- квадруполь – время пролета; продукты из креветок; Аллергенные белки; характерные пептиды