В статье использованы крупнопористые полипропиленовые смолы в качестве матрицы, функциональный мономер метилметакрилат глицидилового эфира-диаминовых кислот (GMA-IDA) в качестве лиганда. Посредством реакций окислительно-восстановительного переноса был приготовлен металлический аффинный хроматографический материал. Сначала на основе реакции эпоксидных групп GMA и иминовой группы IDA был синтезирован функциональный мономер GMA-IDA, затем посредством окислительно-восстановительной реакции двойные связи функционального мономера подверглись реактивному сращиванию с образованием крупнопористых полимерных шариков. Наконец, при 0,1 моль/л растворе никеля отщеплялся Ni²⁺, был получен аффинный хроматографический материал FastSep-GMA-IDA-Ni. Исследовали влияние факторов реакционной смеси (концентрация мономера, концентрация инициатора, pH, температура, время реакции) на адсорбционную емкость белка при сращивании, определили оптимальные условия получения FastSep-GMA-IDA-Ni. Используя бычий гемоглобин в качестве эталонного белка, максимальная статическая емкость связывания FastSep-GMA-IDA-Ni достигла 47,97 мг/мл, что на 25,75% выше коммерческого Ni-аффинного материала. Аффинный материал FastSep-IDA-Ni, полученный методом сопряжения, имел статическую емкость 12,518 мг/мл, значительно ниже, чем у FastSep-GMA-IDA-Ni, полученного методом сращивания. Кроме того, FastSep-GMA-IDA-Ni показал лучшую эффективность передачи белка по сравнению с коммерческими материалами. Было установлено, что с увеличением содержания никеля статическая емкость связывания белка на FastSep-GMA-IDA-Ni возрастает до насыщения при одних и тех же условиях. Результаты показали, что с ростом ионообменной емкости увеличивается содержание хелатированного никеля, максимальное содержание никеля составило 104,06 мкмоль/мл. С помощью FastSep-GMA-IDA-Ni была проведена сепарация и очистка гемагглютинина (HA-His), экспрессируемого клетками CHO, достигнуты хорошие результаты разделения.

Металлический аффинный хроматографический материал; метод сращивания; полимерные шарики; емкость связывания белка; сепарация и очистка