Edwardsiella tarda — медленнорастущая бактерия, являющаяся важным патогеном в аквакультуре. Быстрые, эффективные и пригодные для полевого использования методы обнаружения могут эффективно предотвращать и контролировать возникновение заболеваний. В данной работе сочетаются метод циклической амплификации (RCA) и хроматографические тест-полоски (LFS) с использованием лактексных микросфер в качестве меток, что позволило разработать новый метод обнаружения Edwardsiella tarda на основе RCA-LFS. На основе гена gyrb разработаны блокирующие зонды и соответствующие праймеры для амплификации. Оптимальные условия RCA определены следующим образом: концентрация блокирующего зонда 500 пмоль/л, температура амплификации 61 ℃, время амплификации 50 минут. После амплификации тест-полоска непосредственно погружается в раствор продукта амплификации, и результаты читаются невооруженным глазом. Метод обладает высокой специфичностью, не даёт перекрёстных реакций с другими распространёнными патогенами; предел обнаружения геномной ДНК Edwardsiella tarda составляет 50 нг/мл. По сравнению с распространёнными золотыми метками, лактексные микросферы более стабильны и имеют разнообразную окраску, что потенциально позволяет одновременно обнаруживать несколько бактерий только на основе изменения цвета. Метод RCA-LFS использован для анализа заражённых образцов японского угря, результаты совпали с обычным гель-электрофорезом, при этом метод более простой и быстрый, а интерпретация результатов — проще. RCA-LFS значительно способствует полевому обнаружению патогенных бактерий.

циклическая амплификация;Edwardsiella tarda;блокирующий зонд;лактексные микросферы;хроматографические тест-полоски