В данной работе разработан эффективный и надежный метод определения 9 видов желчных кислот в сухих каплях крови с использованием предварительного дериватирования на колонке - ВЭЖХ - тройного квадрупольного масс-спектрометра. Пробы экстрагировали метанолом с вихревым смешиванием, проводили дериватизацию раствором 2-гидразин пиридина в ацетонитриле, затем сушили, пересушенную пробу растворяли в 50% метанольном водном растворе, фильтровали через органический мембранный фильтр 0,22 мкм, количественный анализ проводился с использованием внутреннего стандарта. Выбрана хроматографическая колонка T3, в качестве элюента использовали воду (0,1% муравьиной кислоты) - метанол-ацетонитрил (9:1, объемное соотношение) для градиентного элюирования, использовался режим положительных ионов, обнаружение велось в режиме множественного реакционного мониторинга. Результаты показали: калибровочные кривые для 9 целевых соединений имели хорошую линейность (r² от 0,9982 до 0,9998), предел обнаружения (LOD) составлял 0,2~2,0 нмоль/л, предел количественного определения (LOQ) — 1,0~10 нмоль/л, восстановление – 92,4%~109%, относительное стандартное отклонение (RSD) было меньше 15%, внутрипакетное и межпакетное RSD были ниже 12%, относительный эффект матрицы составил 89,6%~109% (RSD≤11%), производные стабильны в условиях хранения при 4 ℃ в течение 48 часов. По сравнению с результатами сывороточных образцов, наблюдается высокая корреляция и согласованность. Метод обладает хорошей селективностью и линейностью, не выявлено значительного эффекта матрицы и переносного эффекта, целевые вещества стабильны, метод подходит для быстрого определения желчных кислот в сухих каплях крови.