Метод безмарочного количественного анализа концентрации активности белка (CFCA) на основе технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR) может определять активную концентрацию белка в условиях ограниченной диффузии, используя только известные коэффициенты диффузии белка, без применения каких-либо стандартов. В данном исследовании предложен метод CFCA в форме захвата (CCFCA) для определения активной концентрации белка CYFRA21-1. Результаты показали, что измерения методом CCFCA составили 0,67 мг/мл с внутридневной точностью 4,6%, тогда как методом CFCA — 0,7 мг/мл с внутридневной точностью 6,5%. Кроме того, уровень сопряжения антителы является ключевым фактором, ограничивающим использование CFCA. Неправильные методы хранения или активации чипов приводят к недостаточному уровню сопряжения антител на поверхности чипа, который не удовлетворяет требованиям метода CFCA по преодолению ограничений массопереноса (требования методики подгонки CFCA QC_ratio>0.2), что делает результаты ненадежными. Поскольку метод захвата с помощью белка G обеспечивает оптимальную пространственную ориентацию антител, он обеспечивает точность и стабильность результатов CCFCA даже при низких уровнях сопряжения. По сравнению с классическим методом CFCA, CCFCA дает надежные результаты, и один чип после регенерации может быть использован для нескольких антитело-анализаторных определений, что делает его лучшим выбором для будущих измерений активной концентрации белка.

безмарочная количественная оценка;CYFRA21-1;активная концентрация белка;метод захвата