Разработан метод предколоночного дериватирования/высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием для определения 13 видов ацетилизованных сульфатированных гепарановых (HS) дисахаридов в опухолях мышей с клетками рака поджелудочной железы PANC-1 и CFPAC-1. Образцы опухолей рака поджелудочной железы после обезжиривания и протеолитической обработки подвергались получению HS-дисахаридов, которые реагировали с реактивом производного 2-аминоакридона (AMAC). Разделение проводилось на хроматографической колонке Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C18 с градиентным вымыванием метанолом и 60 ммоль/л ацетатом аммония (pH 5.6), детектирование — при длине возбуждения 425 нм и длине эмиссии 520 нм. Результаты показали хорошую линейную зависимость для 13 видов HS-дисахаридов в пределах соответствующих концентрациев (r2≥0.9990), предел обнаружения (LOD) составлял от 0.012 до 0.313 мкг/мл, предел количественного определения (LOQ) от 0.117 до 1.250 мкг/мл. Относительное стандартное отклонение (RSD) прецизионности находилось в пределах 0.040%–0.63%, внутридневная стабильность RSD была 0.34%–3.6%, междневная — 1.8%–6.4%, возврат добавленной пробы составлял от 80.7% до 109%, при RSD 0.50%–17%. В опухолевой ткани мышей с двумя типами опухолей рака поджелудочной железы было выявлено 9 видов HS-дисахаридов, при этом ΔUA-GlcN (ⅣH) занимал наибольшую долю — 28627.558 нмоль/г и 66938.786 нмоль/г соответственно, за ним следовали ΔUA-GlcNAc (ⅣA) и ΔUA-GlcN, 6S (ⅡH). Результаты молекулярного докинга показали, что ⅣH имеет наибольшую связывающую способность с гепарин-связывающим эпидермальным фактором роста (HB-EGF), а ⅡH — с фактором роста фибробластов-2 (FGF-2). Особенности сульфатированных последовательностей HS и их взаимодействия с HB-EGF и FGF-2 регулируют развитие и прогрессирование рака поджелудочной железы. Результаты исследования могут помочь в раннем лечении и диагностике рака поджелудочной железы.

Рак поджелудочной железы; ацетилированный сульфатированный гепаран; ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием; предколоночное дериватирование