Щелочно-ферментативный гидролиз в сочетании с дисперсной твердофазной экстракцией для повышения точности определения суммарной активности изофлавонов сои
Метод ультразвукового извлечения щелочным метанольным раствором, в сочетании с гидролизом при помощи β-глюкозидазы из миндаля и дисперсным твердофазным экстракцией с полиамидным сорбентом, был разработан для определения суммарной активности изофлавонов сои методом сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии. Глико- и ацетилированные формы изофлавонов в образце при щелочных условиях гидролизуются до основных гликозидов, которые затем далее при участии β-глюкозидазы депротеинируются с образованием соответствующих агликонов. 12 различных форм изофлавонов трансформируются в 3 основных аглика (дайдзеин, генистеин, глицитин), которые выделяются дисперсной твердофазной экстракцией с полиамидом и разделяются на обратноподвижном фазовом C18-сшивном (2.1 мм i.d.×50 мм, 1.8 µm) столбце. Результаты показывают, что дайдзеин, генистеин и глицитин достигают базового разделения за 3 минуты; коэффициенты корреляции стандартных кривых (r2) для всех трёх агликонов превышают 0.999; общий выход изофлавонов составляет 94.3%~102%, относительное стандартное отклонение (RSD, n=6) менее 5.0%, что свидетельствует о высокой точности и прецизионности. Метод основан на определении всего агликонного состава образца для расчёта суммарного содержания изофлавонов, что снижает трудности, связанные с разделением, точностью и стоимостью измерения. Учитывая механизмы метаболизма и физиологического усвоения изофлавонов, подсчёт суммарного содержания агликонов обеспечивает более научную оценку фактической активности изофлавонов, избегая завышений, возникающих при простом суммировании гликозидов и агликонов.