Foi estabelecido um método de análise para 12 nucleosídeos normais e modificados no mRNA de células tumorais. Após a extração total de RNA das amostras de células tumorais, purificação do mRNA e hidrólise do mRNA, foi adicionado 8-bromoguanosina (8Br-G) como padrão interno. Utilizando soluções aquosas com 0,1% de ácido fórmico e soluções de metanol com 0,1% de ácido fórmico como fases móveis, a separação foi realizada na coluna cromatográfica Agilent RRHD SB-C18 (2,1 mm×50 mm, 1,8 μm), com fonte de ionização por eletrospray no modo de íons positivos (ESI+) e detecção em modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM). O método atende aos requisitos de validação metodológica, os 12 nucleosídeos normais e modificados apresentaram boa linearidade dentro de uma faixa de concentração definida, os coeficientes de correlação (r) foram todos superiores a 0,99, o limite de quantificação (LOQ) variou de 0,17 a 3,13 ng/mL e o limite de detecção (LOD) de 0,08 a 1,56 ng/mL. O método desenvolvido foi aplicado às linhas celulares do carcinoma nasofaríngeo humano 5-8F, câncer do colo do útero Hela e células epiteliais renais embrionárias humanas 293T, detectando com sucesso vários níveis de nucleosídeos modificados. O método usa uma quantidade pequena de células (2×10^6 por amostra), tempo de análise curto (6 minutos por amostra) e alta sensibilidade, proporcionando um método analítico eficaz para pesquisa do câncer e diagnóstico clínico.

nucleosídeo; nucleosídeo modificado; mRNA; células tumorais; cromatografia líquida ultrarrápida-espectrometria de massas em tandem (UPLC-MS/MS)