Foi realizada uma caracterização estrutural abrangente do padrão de controle de anticorpo monoclonal tipo IgG1. A massa molecular exata do anticorpo antes e depois da remoção de N-glicanos foi determinada por espectrometria de massa Exactive plus EMR, e a massa molecular completa calculada entre 148.285,0 e 149.020,8, a massa completa após deglicosilação foi de 145.810,4, com teor de N-glicanos entre 1,67% e 2,15%. O método de eletroforese capilar em tempo real com foco isoelétrico por imagem de coluna completa (WCID-cIEF) foi otimizado, e os resultados mostraram que o ponto isoelétrico do anticorpo variava entre 8,21 e 8,74, com o ponto isoelétrico principal em 8,61 e teor relativo de 61,43%. Em seguida, foi utilizada cromatografia de troca iônica para detectar heterogeneidade de carga, sendo encontrado teor de pico básico de 4,1%, pico ácido de 23,9% e pico principal de 72,0%, em concordância com os resultados do WCID-cIEF, confirmando boa reprodutibilidade entre os métodos. A análise dos mapas peptídicos antes e depois da deglicosilação forneceu informações sobre a distribuição dos glicopetídeos, identificou os sítios de modificação glicídica e as regiões determinantes complementares (CDR) das cadeias pesada e leve, os sítios e taxas de oxidação da metionina (M) e, por meio da análise dos mapas peptídicos antes e depois da redução do anticorpo, elucidou as ligações dissulfeto. Os resultados do estudo também indicam que este padrão de controle de anticorpo não apresenta modificação glicídica no terminal C.

padrão de controle de anticorpo;massa molecular;ponto isoelétrico;heterogeneidade de carga;mapa peptídico