Estudo da liberação em tempo real de ROS celulares baseado na técnica de microscopia eletroquímica de varredura

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摘要

Este estudo utilizou a técnica de microscopia eletroquímica de varredura (SECM) para investigar as mudanças em tempo real nas espécies reativas de oxigênio (ROS) em células de câncer de pulmão (A549) estimuladas com acetato de tetradecanoil forbol (PMA). O peróxido de hidrogênio (H2O2) foi usado como alvo para detecção, obtendo imagens eletroquímicas da resposta ao estresse oxidativo celular. Utilizando cloreto de hexamina de rutênio (Ru(NH3)6Cl3) como meio do sistema e a técnica de feedback de corrente negativa, foram obtidas imagens nítidas da morfologia celular, otimizando a distância ideal de detecção entre a sonda e o substrato. Ao definir o potencial da sonda no potencial de redução do peróxido de hidrogênio (-0,65 V), a imagem da corrente permitiu observar a liberação em tempo real de ROS, possibilitando a detecção instantânea da liberação de ROS em células A549 estimuladas por PMA. A ampliação da área de varredura proporcionou imagens SECM da liberação de ROS por diferentes células individuais, possibilitando a captura e reprodutibilidade do sinal ROS em tempo real. Os resultados mostram que o PMA pode perturbar o equilíbrio dinâmico das espécies oxigenadas dentro das células, induzindo uma resposta ao estresse oxidativo. Ao posicionar a sonda no local de liberação dos ROS celulares e detectar a variação da corrente ao longo do tempo, observou-se flutuações na corrente, sugerindo que a liberação extracelular de ROS é um processo dinâmico e pulsante.

关键词

Microscopia eletroquímica de varredura (SECM); Espécies reativas de oxigênio (ROS); H2O2; Células

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