Foi estabelecido um método analítico para a determinação de progesterona no soro humano utilizando cromatografia líquida ultrarrápida acoplada à espectrometria de massas em tandem (UPLC-MS/MS). As amostras de soro foram submetidas a extração líquido-líquido (LLE) com acetato de etila e n-hexano, seguido por separação em gradiente numa coluna cromatográfica Acquity UPLC BEH C18 (2,1 mm×100 mm, 1,7 μm), com tempo de análise cromatográfica de 5 min. A ionização por electrospray (ESI) em modo ião positivo e o modo de monitorização de múltiplas reacções (MRM) foram utilizados, com quantificação por padrão interno isotópico. Foi investigado o impacto da extração em dois passos na recuperação da progesterona, os efeitos das diferentes fases móveis na separação e a estabilidade da amostra, mostrando os resultados que o uso de metanol com solução de amoníaco a 0,1% como fase móvel oferece melhor separação. Em condições otimizadas, a progesterona exibiu boa linearidade na faixa de 10 a 10 000 pg/mL (r2=0,9998), com limites de deteção e quantificação de 5 e 10 pg/mL, respetivamente; a recuperação média adicionada foi de 91,5% a 106%, o desvio padrão relativo (RSD) intra-dia foi de 1,2% a 8,2%, e o RSD inter-dia foi de 4,1% a 9,1%. O método foi aplicado a 30 amostras reais de soro, com concentrações de progesterona variando entre 0,0502 e 1,3635 ng/mL, todas dentro da faixa fisiológica normal. O método apresenta alta sensibilidade, precisão e fiabilidade, sendo adequado para a deteção dos níveis fisiológicos de progesterona em amostras clínicas de soro.

progesterona; diluição isotópica; cromatografia líquida ultrarrápida acoplada à espectrometria de massas em tandem (UPLC-MS/MS); extração líquido-líquido (LLE); soro