Para enfrentar o desafio técnico da alta demanda de amostra inicial na análise glicômica, este estudo desenvolveu uma técnica para preparação de N-glicanos em amostras de pequenas quantidades (GPAT). Ao carregar separadamente materiais C18 e HILIC na ponta da pipeta (Tip), é possível realizar digestão proteica in situ, liberação e enriquecimento dos N-glicanos em uma única etapa. Em comparação com a estratégia de análise do N-glicoma baseada em preparação de amostras assistida por filtração (FASP) amplamente adotada, a técnica GPAT possibilita a liberação e enriquecimento in situ dos N-glicanos de pequenas quantidades de imunoglobulina G (IgG) e proteínas extraídas das células de carcinoma hepatocelular humano HepG2, reduzindo a quantidade inicial da amostra em 90%, e permitindo a detecção de 20 e 39 N-glicanos respectivamente a partir de 10 μg de IgG e 10 μg de proteínas celulares HepG2. A partir de 10 μg de proteínas urinárias extraídas da urina de 6 indivíduos saudáveis (3 homens, 3 mulheres), foram detectados 49 N-glicanos. Este método oferece uma estratégia simples e rápida para análise quantitativa de N-glicanos em amostras complexas de pequenas quantidades, estabelecendo a base para a futura promoção das metodologias glicômicas.

N-glicanos;glicômica;proteínas urinárias;espectrometria de massa em tandem por ionização por dessorção a laser assistida por matriz e tempo de voo